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申请/专利权人：岭南现代农业科学与技术广东省实验室肇庆分中心
摘要：本发明公开了一种同时表达犬瘟热病毒H蛋白和犬细小病毒VP2蛋白的重组狂犬病病毒及其制备方法、疫苗，涉及生物工程技术领域。其中，制备方法包括以下步骤：以pcDNA‑VP2为模板，扩增得到片段pUTR‑VP2；以质粒pHep‑FluryH为模板，扩增得到片段rHep‑Flury；以质粒pHep‑FluryH为模板，扩增得到片段PMGH；将以上片段连接转化，得到重组质粒，转染细胞，即得。本发明的重组病毒能同时高效表达VP2蛋白和H蛋白，且具有良好的遗传稳定性和复制能力。
主权项：1.一种同时表达犬瘟热病毒H蛋白和犬细小病毒VP2蛋白的重组狂犬病病毒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1以质粒pcDNA-VP2为模板，采用核苷酸序列如SEQIDNO：1～2所示的第一引物对扩增，得到片段pUTR-VP2；所述片段pUTR-VP2包含VP2基因；所述质粒pcDNA-VP2的核苷酸序列如SEQIDNO：8所示；2以质粒pHep-FluryH为模板，采用核苷酸序列如SEQIDNO：3～4所示的第二引物对扩增，得到片段rHep-Flury；所述质粒pHep-FluryH的核苷酸序列如SEQIDNO：5所示；3以质粒pHep-FluryH为模板，采用核苷酸序列如SEQIDNO：6～7所示的第三引物对扩增，得到片段PMGH；4将片段pUTR-VP2、片段rHep-Flury和片段PMGH连接，并转化，得到重组质粒pHep-FluryVP2+H；5将重组质粒pHep-FluryVP2+H和质粒pcDNA-N、质粒pcDNA-P、质粒pcDNA-G、质粒pcDNA-L同时转染细胞，即得到同时表达犬瘟热病毒H蛋白和犬细小病毒VP2蛋白的重组狂犬病病毒；其中，所述质粒pcDNA-N的核苷酸序列如SEQIDNO：9所示，所述质粒pcDNA-P的核苷酸序列如SEQIDNO：10所示，所述质粒pcDNA-G的核苷酸序列如SEQIDNO：11所示，所述质粒pcDNA-L的核苷酸序列如SEQIDNO：12所示。
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百度查询： 岭南现代农业科学与技术广东省实验室肇庆分中心 同时表达犬瘟热病毒H蛋白和犬细小病毒VP2蛋白的重组狂犬病病毒及其制备方法、疫苗
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