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申请/专利权人:常州大学
摘要:本发明公开了一种Aspergillussp.CM96孢子修饰毛细管柱手性分离氨基酸的方法,属于生物分析领域。本发明先制备得聚乙烯亚胺修饰的毛细管柱,选用Aspergillussp.CM96孢子作为手性配体制备了新型毛细管柱,在电泳条件对氨基酸对映异构体实现分离。选用脯氨酸对映异构体作为模板分子,可实现脯氨酸对映异构体的基线分离,并初步实现了对精氨酸,组氨酸,苯丙氨酸和色氨酸的手性分离。分离方法操作简单,建立了一种新型高选择性的氨基酸对映异构体的分离检测技术。
主权项:1.一种Aspergillussp.CM96孢子修饰毛细管柱手性分离氨基酸的方法,包括以下步骤:步骤1:毛细管柱的修饰:采用碱和酸对毛细管柱进行预处理,将有机硅烷溶液引入毛细管柱中反应,随后引入聚乙烯亚胺溶液反应,用水冲洗至中性,获得的聚乙烯亚胺修饰的毛细管柱;步骤2:Aspergillussp.CM96孢子的修饰:将Aspergillussp.CM96孢子悬浮液灌入步骤1聚乙烯亚胺修饰的毛细管柱中,再将多聚甲醛溶液灌入柱中反应,反应后采用电泳缓冲液进行冲洗,获得Aspergillussp.CM96孢子修饰毛细管柱;步骤3:毛细管电泳检测:将步骤2获得的Aspergillussp.CM96孢子修饰毛细管柱应用于氨基酸对映异构体的分离:配制柠檬酸-柠檬酸钠电泳缓冲液,将氨基酸溶于电泳缓冲液中,室温下配制成氨基酸溶液,通过Aspergillussp.CM96孢子修饰毛细管柱,在电泳条件对氨基酸对映异构体实现分离;其中氨基酸为精氨酸,组氨酸,苯丙氨酸和色氨酸中的一种;其中,柠檬酸-柠檬酸钠电泳缓冲液pH值为4.5-7.0,电泳缓冲液浓度为20-30mM;电泳分离条件电压为5-20kV,进样量为1-6s。
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