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一种NLS-RARα单克隆抗体的制备方法和一种基于该抗体的快速检测卡及其制备方法 

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申请/专利权人:重庆医科大学附属永川医院

摘要:本发明提供了一种NLS‑RARα单克隆抗体的制备方法和一种基于该抗体的快速检测卡及其制备方法。单克隆抗体的制备方法主要包括:确定靶向蛋白的免疫原、进行实验动物免疫、将免疫后的动物脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合得到杂交瘤细胞、阳性克隆的筛选和大量制备单克隆抗体。然后再基于NLS‑RARα特异性单克隆抗体制作APL快速检测卡。本发明制备的单克隆抗体特异性好;基于NLS‑RARα单克隆抗体的APL快速检测卡,具有微创、方便、快速、经济的特点,可用于外周血检测,且不需要特殊设备,是现有诊疗技术所不具备的优势,且较现有技术更易推广。

主权项:1.一种NLS-RARα单克隆抗体的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:S1、根据NLS-RARα靶蛋白序列选择和设计免疫原,所述免疫原为COM-1a,所述COM-1a的序列为VQSVPGAHPVPV-C,其中,C端表示序列方向的羧基端,所述COM-1a对应的抗体为1a,COM-1a多肽免疫原针对PML-RARα的NE切割位点设计,免疫产生特异性识别NLS-RARα的特异性抗体;S2、用S1设计的免疫原进行实验动物免疫;S3、将S2免疫后的实验动物的脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合,得到杂交瘤细胞;S4、将S3中融合的杂交瘤细胞培养2-3周后,取培养液上清进行ELISA检测,初步筛选阳性克隆;S5、采用免疫印迹方法进行验证与再次筛选,获得特异性好,抗体浓度高的阳性克隆;S6、大量制备单克隆抗体。

全文数据:

权利要求:

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