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申请/专利权人：深圳迈吉赛尔生物科技有限公司

申请日：2022-12-18

公开（公告）日：2023-09-19

公开（公告）号：CN116121178B

专利技术分类：...成人干细胞[2010.01]

专利摘要：本申请公开了一种肠道干细胞及其在制备改善肠道微环境以及抗肠道衰老制剂中的应用。该肠道干细胞包括表达Lgr5的肠道干细胞和表达B1的肠道干细胞，并经过WB检测和mRNA水平检测，发现二者的P2代细胞还分别表达了c‑Myc‑F、Sox9和MSI1。另外，通过体外和体内试验证实了这些干细胞具有具有维持小肠隐窝增殖和正常稳态，改善肠道微环境，使得其肠道微环境向益生方向改善，并具有改善小鼠肠道分化功能缺陷的作用。

专利权项：1.一种肠道干细胞的传代培养方法，包括以下步骤：分离得到表达Lgr5的肠道干细胞和表达Bmi1的肠道干细胞，所述表达Lgr5的肠道干细胞和所述表达Bmi1的肠道干细胞均来自于十二肠上皮组织；以及将所述表达Lgr5的肠道干细胞和所述表达Bmi1的肠道干细胞分别于原代培养液和传代培养液进行传代培养，传代次数不超过4代，每次代培养时间不超过48h；其中，用于培养所述表达Lgr5的肠道干细胞的原代培养液为10~20mMHEPES、5~10mM谷氨酰胺、0.2~2倍N2细胞培养添加剂、0.2~2mgmLCDFeed002、80~100UmL青霉素、80~100mgmL链霉素、2~5μgmL转铁蛋白、10~20μgmL胰岛素、0.10~0.25mM非必需氨基酸、0.2~1mM丙酮酸钠的DMEMF12培养基；其中，用于传代培养所述表达Lgr5的肠道干细胞的传代培养液为8~15mMHEPES、3~8mM谷氨酰胺、0.2~1mgmLCDFeed002、80~100UmL青霉素、80~100mgmL链霉素、2~5μgmL转铁蛋白、10~20μgmL胰岛素、0.10~0.25mM非必需氨基酸、0.2~1mM丙酮酸钠的DMEMF12培养基；其中，用于培养所述表达Bmi1的肠道干细胞的原代培养液为10~20mMHEPES、5~10mM谷氨酰胺、0.5~2mgmLCDFeed002、80~100UmL青霉素、80~100mgmL链霉素、2~5μgmL转铁蛋白、10~20μgmL胰岛素、0.10~0.25mM非必需氨基酸、0.2~1mM丙酮酸钠的DMEMF12培养基；其中，用于培养所述表达Bmi1的肠道干细胞的传代培养液为5~10mMHEPES、2~6mM谷氨酰胺、0.1~0.5mgmLCDFeed002、50~80UmL青霉素、50~80mgmL链霉素、2~5μgmL转铁蛋白、10~20μgmL胰岛素、0.10~0.25mM非必需氨基酸、0.2~1mM丙酮酸钠的DMEMF12培养基。

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