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一种解除细菌基因组碳代谢物阻遏效应(CCR)的新方法 

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申请/专利权人:天津理工大学

摘要:CRISPR基因编辑技术是利用细菌获得性免疫机制,以及DNA复制过程的自我修复功能,对生物体中某一个或多个特定的目标基因或靶点进行编辑改造,碳分解代谢物阻遏效应CarbonCataboliteRepressionCCR,即细菌总是优先利用不需要经过复杂代谢的碳源,当这种底物存在时就会抑制代谢其他底物的基因表达,产生代谢物阻遏效应。本发明提供了一种采用基因编辑方法解除一株短小芽孢杆菌Bacilluspumilus全基因组CCR效应的新方法,对细菌基因工程技术的发展具有重要意义。采用CRES的共有序列WWGNAANCGNWNNCW作为gRNA,设计出一种多靶点结合的非特异性gRNA编辑系统UgRNACas9。采用该系统针对一株野生型Bacilluspumilus全基因组CRES进行编辑,在显著变化的通路中随机选取35个基因,进行DNA测序,结果表明这35个基因的突变位点均发生在CRES类似序列中。

主权项:1.一种新型的解除短小芽孢杆菌Bacilluspumilus全基因组碳代谢物阻遏效应CCR的编辑方法,利用CRISPRCas9技术全局编辑CRE序列,包括:a.根据CRE共有序列WWGNAANCGNWNNCW设计简并的UgRNA;b.组合型重组质粒UgRNACas9编辑子转化G+细菌;c.DNA测序重组菌中CRES突变位点。

全文数据:

权利要求:

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