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申请/专利权人：汕头大学
摘要：本发明涉及一种鉴定拟穴青蟹关键基因在LC‑PUFA合成通路中功能的方法及其应用，本发明利用高保真酶KOD‑Plus‑Neo大大提高ORF扩增的特异性及扩增效率；采用配套的pYES2质粒、改造的INVSc1酿酒酵母感受态细胞以及PEGLiAc，实现较高质粒转化效率与成功率；收集重组酵母菌后采用绿色安全无毒的脂肪酸甲酯化方法BHT法，大大降低脂肪酸检测和功能鉴定的操作难度。本发明的鉴定方法具有操作简便、耗时短、重复性好、准确率高等优点。通过鉴定拟穴青蟹LC‑PUFA生物合成通路中关键脂肪酸延长酶以及去饱和酶基因的功能，可探寻提升青蟹LC‑PUFA合成能力的调控靶点，为全面解析拟穴青蟹LC‑PUFA合成通路奠定基础；还可丰富海洋甲壳动物脂肪酸营养的研究理论，优化青蟹饲料配方，助力实现青蟹饲料精准营养。
主权项：1.一种鉴定拟穴青蟹关键基因在LC-PUFA合成通路中功能的方法，其特征在于，包括以下步骤：1利用高保真酶KOD-Plus-Neo扩增获得关键基因的ORF区，构建重组表达载体；2采用pYES2质粒、酿酒酵母感受态细胞和PEGLiAc试剂转化pYES2-关键基因重组质粒；然后加入脂肪酸底物和半乳糖溶液诱导重组质粒；3收集重组酵母菌，采用BHT法进行脂肪酸甲酯化前处理；4检测脂肪酸，根据脂肪酸检测结果判断有无对应的脂肪酸底物延长功能以及相应的延长效率。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 汕头大学 一种鉴定拟穴青蟹关键基因在LC-PUFA合成通路中功能的方法及其应用
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