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申请/专利权人：北京化工大学

摘要：本发明公开了一种基于APE1酶驱动三足DNAWalker构造的可再生电化学生物传感器用于检测miRNA‑155的方法。在金电极GE上滴加经TCEP活化的捕获探针CP溶液称为CPGE；用MCH溶液处理CPGE称为MCHCPGE；将退火形成的AP发夹溶液滴在MCHCPGE上称为APMCHCPGE；退火得到的发夹H1、H2和H3特异性识别靶标miRNA‑155，通过CHA反应生成稳定的三足DNAWalkerTDW；以APE1酶作为驱动力，与TDW完全混合后滴加到金电极表面称为TDW‑APE1APMCHCPGE；随着TDW在电极表面的行走，AP发夹被切割的同时释放出AP‑1链。随后加入S1链杂交电极表面剩余的AP‑2链，得到仅剩CP链的金电极，实现电化学信号的变化。此外，本发明通过在金电极表面滴加S2溶液，实现电极的还原再生。用SWV测量得到不同浓度miRNA‑155的电流信号，获得miRNA‑155特异性检测结果。

主权项：1.一种基于APE1酶驱动三足DNAWalker检测miRNA-155的可再生电化学生物传感器，其特征在于，步骤为：1在金电极GE上滴经TCEP活化的捕获探针CP溶液，以形成CP修饰电极界面称为CPGE；2将步骤1得到的CPGE用超纯水洗涤并在N2中干燥后，用MCH溶液中处理0.5h称为MCHCPGE；3将退火形成的AP发夹溶液滴在步骤2得到的MCHCPGE上称为APMCHCPGE；4在TAEMg2+缓冲液中，靶标miRNA-155与H1、H2和H3反应生成稳定的三足DNAWalkerTDW；5将步骤4得到TDW和APE1酶完全混合后滴加到步骤3得到的APMCHCPGE表面，APE1驱动TDW行走不断切割AP，释放出AP-1链剩余AP-2链，得到AP-2MCHCPGE表面；6将步骤5得到的AP-2MCHCPGE冲洗吹干后，室温下将S1链溶液加入其表面孵育2h称为S1AP-2MCHCPGE，以置换走AP-2，得到MCHCPGE；7在室温下滴加MB溶液到步骤6得到的MCHCPGE表面，并在黑暗中孵育30min得到检测miRNA-155的电流信号，由于步骤6中S1的置换作用，可实现靶标触发的电流变化差异最大化；8将不同浓度的miRNA-155加入步骤4中，完成5-7步骤，可通过SWV测量得到不同浓度miRNA-155的电流信号；9为了重置生物传感器，通过滴加S2溶液可置换出检测靶标后电极表面残余未反应的AP链，得到完全再生的MCHCPGE表面，再用新鲜的AP发夹杂交以重新实现步骤3电极的再生，可用于新一轮检测操作。

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