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申请/专利权人：东莞市农业科学研究中心;华南农业大学
摘要：本发明涉及一种转GFP基因的冬瓜枯萎病菌转化子的转化方法及转化子，属于微生物基因工程技术领域。本发明转GFP基因的冬瓜枯萎病菌转化子的转化方法，包括利用GFP质粒与冬瓜枯萎病菌原生质体的悬浮液混合对GFP基因进行转化、转化子的筛选。利用本发明的转化方法，能够准确、高效的转化出含有GFP基因和潮霉素B抗性基因的冬瓜枯萎病菌转化子，获得的转化子较原始菌株的抗潮霉素能力大大增加，GFP基因表达高效稳定；本发明的转化子具有良好的遗传稳定性，能够有效入侵冬瓜植株，对宿主植株的生长特性并无影响，与野生型具有同等的致病性；能够作为模式菌株用于尖孢镰刀菌冬瓜专化型侵染过程、致病机理及枯萎病生物防治机制的研究。
主权项：1.一种转GFP基因的冬瓜枯萎病菌转化子的转化方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、GFP基因的转化将GFP质粒与冬瓜枯萎病菌原生质体的悬浮液混合均匀，冰浴静置；然后加入PTC缓冲溶液混合均匀，冰浴静置；接着加入含有氨苄西林的TB3培养基，震荡培养18-20h，离心，弃上清，STC缓冲溶液重悬，得到转化悬液；S2、转化子的筛选将步骤S1制备的转化悬液与融化的含有氨苄西林和潮霉素B的BottomAgar培养基混合均匀，制备平板，培养8-12h；然后在平板上添加含有氨苄西林和潮霉素B的TopAgar培养基，冷却后继续培养1-2天；挑取单菌落的阳性转化子接种于含有氨苄西林和潮霉素B的PDA培养基培养1-2天进行筛选，选取能够在PDA培养基继续生长且荧光鉴定绿色的单菌落，即为转GFP基因的冬瓜枯萎病菌转化子。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 东莞市农业科学研究中心 华南农业大学 一种转GFP基因的冬瓜枯萎病菌转化子的转化方法及转化子
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