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申请/专利权人：乌鲁木齐海关技术中心
摘要：本发明属于农业和植物检疫领域，具体涉及一种基于3D‑dPCR检测向日葵黑茎病菌的方法，包括以下步骤：S1提取DNA：将黑茎病菌菌株培养，选取纯化的单菌落菌块，提取其植物基因组DNA，测量DNA浓度和纯度后保存备用；S2合成引物探针：选择LLI1FLLI1R为引物、LLI为探针合成；所述LLI1F核酸序列为：5′‑CTTGGGAAACTCGCCTCAAA‑3′；所述LLI1R核酸序列为：5′‑AAGCAAGAGGCGCAAAATGT‑3′；所述LLI核酸序列为：5′‑TATGAGCCTGGAGCGCA‑3′；S3构建目的基因质粒：选取目的核酸序列，合成质粒重组菌，将质粒重组菌活化培养后提取目的基因质粒；S43D‑dPCR反应：以目的基因质粒DNA为模板，进行3D‑dPCR扩增反应。该方法基于3D‑dPCR检测技术，通过改变实验条件，大大降低了向日葵黑茎病菌的检测限，在海关等检测场景中具有很强的使用价值。
主权项：1.一种基于3D-dPCR检测向日葵黑茎病菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1提取DNA：将黑茎病菌菌株培养，选取纯化的单菌落菌块，提取其植物基因组DNA，测量DNA浓度和纯度后保存备用；S2合成引物探针：选择LLI1FLLI1R为引物、LLI为探针合成；所述LLI1F核酸序列为：5′-CTTGGGAAACTCGCCTCAAA-3′；所述LLI1R核酸序列为：5′-AAGCAAGAGGCGCAAAATGT-3′；所述LLI核酸序列为：5′-TATGAGCCTGGAGCGCA-3′；S3构建目的基因质粒：选取目的核酸序列，合成质粒重组菌，将质粒重组菌活化培养后提取目的基因质粒；S43D-dPCR反应：以目的基因质粒DNA为模板，进行3D-dPCR扩增反应。
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权利要求：
百度查询： 乌鲁木齐海关技术中心 一种基于3D-dPCR检测向日葵黑茎病菌的方法
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