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申请/专利权人：唐山师范学院
摘要：本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种基于响应面的茶薪菇原生质体制备方法，包括如下步骤：1取茶薪菇菌丝，过滤，冲洗，无菌纸吸干；2茶薪菇菌丝悬浮于双酶溶液中，温度为25‑33℃，100r·min‑1振荡酶解1‑5h；3步骤2得到的茶薪菇，过滤，除去菌丝碎屑，离心收集原生质体，洗涤3次，加入甘露醇渗透压稳定剂制成悬浮液，计数；其中，菌龄、溶壁酶浓度、蜗牛酶浓度、酶解时间、酶解温度对其原生质体产量和再生率有显著影响，茶薪菇原生质体平均产量为4.39×107个·mL‑1，平均再生率为15.3％。本研究利用双酶酶解制备技术，得到最优工艺参数将为今后以茶薪菇原生质体进行遗传转化、基因组重排、基因编辑技术的后续分子生物学科学研究奠定了基础。
主权项：1.一种基于响应面的茶薪菇原生质体制备方法，其特征在于，包括如下步骤：1取茶薪菇菌丝，过滤，冲洗，无菌纸吸干；2步骤1得到的茶薪菇菌丝悬浮于双酶溶液中，温度为25-33℃，100r·min-1振荡酶解1-5h；3步骤2得到的茶薪菇，过滤，除去菌丝碎屑，离心收集原生质体，洗涤3次，加入甘露醇渗透压稳定剂制成悬浮液，计数；步骤1所述的茶薪菇菌丝菌龄为5-10d；步骤2所述的双酶溶液包括0.5％-2.5％溶壁酶酶液和1％-9％蜗牛酶酶液。
全文数据：
权利要求：
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