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申请/专利权人：山东中医药大学

摘要：本发明公开了SmHD‑Zip12基因在调控丹参毛状根性状中的应用，属于基因工程技术领域。所述SmHD‑Zip12基因的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示；所述丹参毛状根性状为根长、根粗、根毛数量、根重中的任意一种或两种以上。本发明还公开了一种过表达SmHD‑Zip12基因的丹参植株的构建方法：构建含有SmHD‑Zip12基因的过表达载体，利用农杆菌介导法侵染丹参无菌叶片，培养即得。本发明通过研究发现，SmHD‑Zip12基因对丹参毛状根的性状具有正向调控作用，过表达SmHD‑Zip12基因可使丹参毛状根的根长更长、根粗更粗、根毛数量更多、根重更重。本发明具有较高的产业价值。

主权项：1.过表达SmHD-Zip12基因在正向调控丹参毛状根性状中的应用，其特征在于：所述SmHD-Zip12基因的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示；在丹参植株中过表达SmHD-Zip12基因，则丹参毛状根的根长更长，根粗更粗，根毛数量更多，根重更重；在丹参植株中过表达SmHD-Zip12基因的具体方式为：一重组质粒转化发根农杆菌1100μL的Ar.Qual发根农杆菌加入5μL的pMDC202-SmHD-Zip12质粒，用手快速、剧烈拨打管底混匀，依次放于冰中静置5min、液氮5min、37℃水浴5min、冰浴5min；2室温条件下加入700μL无抗生素YEB液体培养基，于28℃振荡培养2h；36000rpm离心1min，弃掉700μL上清，轻轻吹打重悬菌块，涂布于含50mgLKana和50mgLStr的YEB平板上，倒置放于28℃培养箱培养3天；4挑取单菌落，接种于7.5mL的含50mgLKana和50mgLStr的YEB液体培养基，28℃、200rpm培养12h，通过菌落PCR方法鉴定阳性克隆；二诱导丹参毛状根1吸取750μL转化了pMDC202-SmHD-Zip12的农杆菌菌液，加入到75mL的含50mgmLStr和50mgmLKana的YEB液体培养基中，28℃、200rpm摇至OD600为0.6；2将上述活化的菌液转移至50mL离心管，4000rpm离心10min，弃上清；3用50mL的MS液体培养基重悬菌体，转移至锥形瓶中，200rpm、28℃培养30min；4选取继代30天长势良好的丹参无菌苗叶片，将叶片剪成0.5cm2大小的小块，转入上述锥形瓶中，200rpm、28℃侵染10min；5在超净工作台中用无菌滤纸吸干叶片表面菌液，转移至含200μmolL乙酰丁香酮的MS固体培养基，置于暗环境下共培养3天；6无菌水冲洗叶片5遍，用无菌滤纸吸干后，接种于含500mgL头孢噻肟钠和200μmolL乙酰丁香酮MS分化培养基上；7待毛状根长出5cm以上后，分离单根系；每7天更换一次培养基，并逐渐降低头孢噻肟钠浓度，最终转移至无抗生素的MS培养基中培养；8在MS固体培养基上培养1个月后无细菌生长，转移至50mL的MS培养基中，25℃、120rpm暗环境下扩大培养。

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权利要求：

百度查询： 山东中医药大学 SmHD-Zip12基因在调控丹参毛状根性状中的应用