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申请/专利权人：皖南医学院
摘要：本发明提供了一种提取粉尘螨总RNA的方法，先用10％SDS、水饱和酚和DEPC水构成核酸萃取液，65℃温育10min，使裂解液效果最大化；加入β‑巯基乙醇与SDS联用抑制RNase活性；使用液氮研磨、加入pH＝3.8的醋酸钠缓冲液匀浆；再加入蛋白酶K，后面进行两次抽提，第一次加入水饱和酚，用二次再用氯仿抽提；最后对总RNA进行纯化，利用乙二醇丁醚对RNA沉淀。与现有技术相比，本发明所用试剂常见，操作简单，成本低，RNA质量合格，提取效果稳定，且能够解决提取粉尘螨总RNA不完整、DNA、蛋白污染严重、存在色素影响现象等问题。
主权项：1.一种提取粉尘螨总RNA的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：1粉尘螨液氮处理，然后加入孵育后的核酸萃取液A以及冰浴处理的核酸萃取液B，冰上研磨混匀，室温静置，得到粉尘螨组织匀浆液；2向粉尘螨组织匀浆液中加入核酸萃取液C与核酸萃取液D，摇晃混匀，室温孵育，离心，提取上层清液1；3再向上层清液1中加入核酸萃取液E，摇晃混匀，室温孵育，离心，提取上层清液2；4再向上层清液2中加入核酸萃取液F，摇晃混匀，室温孵育，离心，提取上层清液3；5再向上层清液3中加入核酸萃取液G，颠倒混匀，室温孵育，离心，去液留沉淀物；6向步骤5所得沉淀物中加入核酸萃取液H，摇晃混匀，离心，去液得沉淀物；置于室温通风处干燥，加入在DEPC水中，吹打混匀，在零下-80℃下保存；步骤1中，所述核酸萃取液A包括浓度10％的十二烷基硫酸钠SDS、水饱和酚和DEPC；所述核酸萃取液B为β-巯基乙醇；步骤2中，所述核酸萃取液C溶液为醋酸钠缓冲液；所述核酸萃取液D为蛋白酶K；步骤3中，所述核酸萃取液E包含如下原料；步骤4中，所述核酸萃取液F包含氯仿和异戊醇；步骤5中，所述核酸萃取液G为乙二醇丁醚；步骤6所述核酸萃取液H为体积分数75％乙醇溶液。
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