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申请/专利权人：南京大学;南开大学

摘要：本发明公开了一种基于RPA‑CRISPRCas12a的MCR‑1耐药基因快速检测方法，属于生物技术领域。本发明基于“DNA提取‑恒温扩增‑快速检测”的检测模式，提取环境样本中的DNA，设计MCR‑1耐药基因的CDS保守区域的扩增引物并进行恒温扩增，将crRNA、Cas12a蛋白、单链DNA分子探针加入到上述扩增产物中，激发Cas12a的反向切割单链DNA分子探针释放信号报告分子。本发明建立的MCR‑1耐药基因实时检测体系操作简单、灵敏度高、可实现即时、原位检测，检测MCR‑1耐药基因的最低检测限为100copiesml。

主权项：1.一种MCR-1耐药基因的检测试剂，其特征在于包括RPA-CRISPR-Cas检测体系，所述CRISPR-Cas检测体系包括：crRNA、MCR-1耐药基因的RPA扩增引物、Cas12a蛋白和单链DNA分子探针，所述单链DNA分子探针两端携带信号报告分子，所述检测试剂的检测靶标为MCR-1耐药基因CDS区域的保守序列，如SEQIDNo：1所示：5’TTTGCCAAATTCACGCCAGTGTGTGAA3’，所述MCR-1耐药基因的RPA扩增引物选自如下引物对中的一种：1RPA-F1：5’GCGATGTCGGTATGCTCGTTGGCTTAGATGACTTT3’SEQIDNo：2；RPA-R1：5’CTGACATACAGCATTGAGACATCATAGGCATTGCT3’SEQIDNo：3；2RPA-F2：5’GCGATGTCGGTATGCTCGTTGGCTTAGATGACTTT3’SEQIDNo：4；RPA-R2：5’GTGCGTCTGCAGCCACTGGATACTTTGAGCGATGA3’SEQIDNo：5；3RPA-F3：5’GCGATGTCGGTATGCTCGTTGGCTTAGATGACTTT3’SEQIDNo：6；RPA-R3：5’GACTTTCGCCATGATCGCTGACATACAGCATTGAG3’SEQIDNo：7；4RPA-F4：5’CCGCGATGTCGGTATGCTCGTTGGCTTAGATGACT3’SEQIDNo：8；RPA-R4：5’CTGACATACAGCATTGAGACATCATAGGCATTGCT3’SEQIDNo：9；5RPA-F5：5’CCGCGATGTCGGTATGCTCGTTGGCTTAGATGACT3’SEQIDNo：10；RPA-R5：5’GTGCGTCTGCAGCCACTGGATACTTTGAGCGATGA3’SEQIDNo：11。

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权利要求：

百度查询： 南京大学 南开大学 一种基于RPA-CRISPR/Cas12a的MCR-1耐药基因快速检测方法