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申请/专利权人：吉林省养蜂科学研究所(吉林省蜂产品质量管理监督站、吉林省蜜蜂遗传资源基因保护中心)

摘要：本发明提供了保种蜜蜂非遗传图谱85个STRs位点的PCR质量控制及PCR扩增子制备方法。本发明的方法包括以蜜蜂Apismellifera的基因组DNA为模板，分别使用检测蜜蜂非遗传图谱85个STRs位点的具备特异性和稳定性的85对引物对进行85组PCR扩增反应，并通过对PCR反应的条件进行优化改良获得了优势扩增和稳定扩增的85种PCR产物扩增子标准品，可应用于制备鉴定蜜蜂系谱关系的标准品，提高蜜蜂保种鉴定的质量控制操作标准，提高保种蜜蜂STRs位点的利用率。

主权项：1.制备检测蜜蜂非遗传图谱STRs位点的PCR扩增子标准品的方法，其特征在于：所述PCR扩增子标准品包括85种PCR产物，所述方法包括以蜜蜂Apismellifera的基因组DNA为模板，分别使用85对引物对进行85组PCR扩增反应获得所述85种PCR产物的步骤；所述85组PCR扩增反应的体系的总体积为：所述85组的第1-第52组及第54-第85组PCR的反应体系总体积为10μL，第53组的反应体系总体积为25μL；所述85组PCR扩增反应的体系中所述模板含量为：所述85组的第1-14组、第48-50组、第51-52组、第58-69组和第71-82组的所述模板含量为25ng，第15-47组、第54-57组和第70组的所述模板含量为5-10ng，第53组的所述模板含量为15-25ng，第83-85组的所述DNA模板含量为5ng；所述85组PCR扩增反应体系中dNTP的终浓度为：所述85组的第1-14组的dNTP浓度为0.2mmolL，第15-21组、第51-57组、第70组和第73组的dNTP浓度为0.075mmolL，第22-47组的dNTP浓度为0.06mmolL，第48-50组的dNTP浓度为0.02mmolL，第58-69组、第71-72组和第74-85组dNTP浓度为0.25mmolL；所述85组PCR扩增反应体系中MgCI2终浓度为：所述85组的第1-14组的MgCI2浓度为1.5mmolL，第15-21组第48-50组和第70组的MgCI2浓度为1.2-1.5mmolL，第22-47组的MgCI2浓度为1-2.5mmolL，第51-52组的MgCI2浓度为1-1.2mmolL，第53组的MgCI2浓度为1.7mmolL，第54-57组和第73组的MgCI2浓度为1.2-1.7mmolL，第58-69组和第74-85组的MgCI2浓度为2.5mmolL，第71-72组的MgCI2浓度为1.2mmolL；所述85组PCR扩增反应对应的所述85对引物对的核苷酸序列如下：A1第1对引物对由序列表中序列1和序列2所示的两条单链DNA组成；A2第2对引物对由序列表中序列3和序列4所示的两条单链DNA组成；A3第3对引物对由序列表中序列5和序列6所示的两条单链DNA组成；A4第4对引物对由序列表中序列7和序列8所示的两条单链DNA组成；A5第5对引物对由序列表中序列9和序列10所示的两条单链DNA组成；A6第6对引物对由序列表中序列11和序列12所示的两条单链DNA组成；A7第7对引物对由序列表中序列13和序列14所示的两条单链DNA组成；A8第8对引物对由序列表中序列15和序列16所示的两条单链DNA组成；A9第9对引物对由序列表中序列17和序列18所示的两条单链DNA组成；A10第10对引物对由序列表中序列19和序列20所示的两条单链DNA组成；A11第11对引物对由序列表中序列21和序列22所示的两条单链DNA组成；A12第12对引物对由序列表中序列23和序列24所示的两条单链DNA组成；A13第13对引物对由序列表中序列25和序列26所示的两条单链DNA组成；A14第14对引物对由序列表中序列27和序列28所示的两条单链DNA组成；A15第15对引物对由序列表中序列29和序列30所示的两条单链DNA组成；A16第16对引物对由序列表中序列31和序列32所示的两条单链DNA组成；A17第17对引物对由序列表中序列33和序列34所示的两条单链DNA组成；A18第18对引物对由序列表中序列35和序列36所示的两条单链DNA组成；A19第19对引物对由序列表中序列37和序列38所示的两条单链DNA组成；A20第20对引物对由序列表中序列39和序列40所示的两条单链DNA组成；A21第21对引物对由序列表中序列41和序列42所示的两条单链DNA组成；A22第22对引物对由序列表中序列43和序列44所示的两条单链DNA组成；A23第23对引物对由序列表中序列45和序列46所示的两条单链DNA组成；A24第24对引物对由序列表中序列47和序列48所示的两条单链DNA组成；A25第25对引物对由序列表中序列49和序列50所示的两条单链DNA组成；A26第26对引物对由序列表中序列51和序列52所示的两条单链DNA组成；A27第27对引物对由序列表中序列53和序列54所示的两条单链DNA组成；A28第28对引物对由序列表中序列55和序列56所示的两条单链DNA组成；A29第29对引物对由序列表中序列57和序列58所示的两条单链DNA组成；A30第30对引物对由序列表中序列59和序列60所示的两条单链DNA组成；A31第31对引物对由序列表中序列61和序列62所示的两条单链DNA组成；A32第32对引物对由序列表中序列63和序列64所示的两条单链DNA组成；A33第33对引物对由序列表中序列65和序列66所示的两条单链DNA组成；A34第34对引物对由序列表中序列67和序列68所示的两条单链DNA组成；A35第35对引物对由序列表中序列69和序列70所示的两条单链DNA组成；A36第36对引物对由序列表中序列71和序列72所示的两条单链DNA组成；A37第37对引物对由序列表中序列73和序列74所示的两条单链DNA组成；A38第38对引物对由序列表中序列75和序列76所示的两条单链DNA组成；A39第39对引物对由序列表中序列77和序列78所示的两条单链DNA组成；A40第40对引物对由序列表中序列79和序列80所示的两条单链DNA组成；A41第41对引物对由序列表中序列81和序列82所示的两条单链DNA组成；A42第42对引物对由序列表中序列83和序列84所示的两条单链DNA组成；A43第43对引物对由序列表中序列85和序列86所示的两条单链DNA组成；A44第44对引物对由序列表中序列87和序列88所示的两条单链DNA组成；A45第45对引物对由序列表中序列89和序列90所示的两条单链DNA组成；A46第46对引物对由序列表中序列91和序列92所示的两条单链DNA组成；A47第47对引物对由序列表中序列93和序列94所示的两条单链DNA组成；A48第48对引物对由序列表中序列95和序列96所示的两条单链DNA组成；A49第49对引物对由序列表中序列97和序列98所示的两条单链DNA组成；A50第50对引物对由序列表中序列99和序列100所示的两条单链DNA组成；A51第51对引物对由序列表中序列101和序列102所示的两条单链DNA组成；A52第52对引物对由序列表中序列103和序列104所示的两条单链DNA组成；A53第53对引物对由序列表中序列105和序列106所示的两条单链DNA组成；A54第54对引物对由序列表中序列107和序列108所示的两条单链DNA组成；A55第55对引物对由序列表中序列109和序列110所示的两条单链DNA组成；A56第56对引物对由序列表中序列111和序列112所示的两条单链DNA组成；A57第57对引物对由序列表中序列113和序列114所示的两条单链DNA组成；A58第58对引物对由序列表中序列115和序列116所示的两条单链DNA组成；A59第59对引物对由序列表中序列117和序列118所示的两条单链DNA组成；A60第60对引物对由序列表中序列119和序列120所示的两条单链DNA组成；A61第61对引物对由序列表中序列121和序列122所示的两条单链DNA组成；A62第62对引物对由序列表中序列123和序列124所示的两条单链DNA组成；A63第63对引物对由序列表中序列125和序列126所示的两条单链DNA组成；A64第64对引物对由序列表中序列127和序列128所示的两条单链DNA组成；A65第65对引物对由序列表中序列129和序列130所示的两条单链DNA组成；A66第66对引物对由序列表中序列131和序列132所示的两条单链DNA组成；A67第67对引物对由序列表中序列133和序列134所示的两条单链DNA组成；A68第68对引物对由序列表中序列135和序列136所示的两条单链DNA组成；A69第69对引物对由序列表中序列137和序列138所示的两条单链DNA组成；A70第70对引物对由序列表中序列139和序列140所示的两条单链DNA组成；A71第71对引物对由序列表中序列141和序列142所示的两条单链DNA组成；A72第72对引物对由序列表中序列143和序列144所示的两条单链DNA组成；A73第73对引物对由序列表中序列145和序列146所示的两条单链DNA组成；A74第74对引物对由序列表中序列147和序列148所示的两条单链DNA组成；A75第75对引物对由序列表中序列149和序列150所示的两条单链DNA组成；A76第76对引物对由序列表中序列151和序列152所示的两条单链DNA组成；A77第77对引物对由序列表中序列153和序列154所示的两条单链DNA组成；A78第78对引物对由序列表中序列155和序列156所示的两条单链DNA组成；A79第79对引物对由序列表中序列157和序列158所示的两条单链DNA组成；A80第80对引物对由序列表中序列159和序列160所示的两条单链DNA组成；A81第81对引物对由序列表中序列161和序列162所示的两条单链DNA组成；A82第82对引物对由序列表中序列163和序列164所示的两条单链DNA组成；A83第83对引物对由序列表中序列165和序列166所示的两条单链DNA组成；A84第84对引物对由序列表中序列167和序列168所示的两条单链DNA组成；A85第85对引物对由序列表中序列169和序列170所示的两条单链DNA组成。

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