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申请/专利权人：中山大学
摘要：本发明属于基因测序技术领域，具体涉及一种不依赖PolyA尾的纳米孔直接RNA测序建库方法。本发明通过优化接头设计使反转录接头的连接摆脱对PolyA尾的依赖，在反转录接头连接后使用UDG和内切酶的组合去除接头屏蔽，再连接测序接头进行直接RNA测序。该方法不依赖RNA的PolyA尾，可有效捕获多种无PolyA尾或短PolyA尾的RNA分子进行直接RNA测序。同时，该方法不仅可以获得多种类型的RNA表达量，还可以进行多修饰分析、PolyA尾长度分析等。此外，该方法操作相对简便，无需扩增，无特殊试剂、仪器的要求，可兼容多种上游细胞处理过的RNA进行建库，且兼容R9和RNA004芯片的建库方法。
主权项：1.一种不依赖PolyA尾的纳米孔直接RNA测序建库方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、合成序列中带有dU碱基且末端屏蔽的3'接头序列，并使用KQ突变的T4RNA连接酶将3'接头序列连接至RNA样品3'末端；S2、利用UDG与核酸内切酶的双酶混合物对3'接头序列的dU碱基进行酶切，去除3'接头序列的末端屏蔽；S3、使用MaximaHminus反转录酶对含3'接头序列的RNA进行反转录，之后即可按照ONT官方的直接RNA测序建库方法进行测序接头连接、上机测序。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 中山大学 一种不依赖PolyA尾的纳米孔直接RNA测序建库方法
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