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申请/专利权人：四川师范大学
摘要：本发明公开一种PBGS低酶活性突变体及其构建方法，以谷氨酸棒杆菌基因组DNA为模板，克隆PBGS编码基因，纯化后经双酶切，连接进入pET28a+，得到表达载体；对克隆PBGS单亚基结构进行从头预测结构建模，基于单亚基与5‑ALA的对接模型结构设计突变体；表达载体转入大肠杆菌，基于S2所述对接模型，选取突变位点，用定点突变试剂盒进行定点突变，获得重组菌株；分析重组菌株酶活力，获取突变体。本发明获得低活性的PBGS突变体，通过适度降低活性，利用突变体进行5‑ALA合成途径的改造，既能满足5‑ALA的积累，又能使血红素合成代谢途径不会中断，能够满足细胞生长所需。
主权项：1.一种PBGS低酶活性突变体的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、以谷氨酸棒杆菌基因组DNA为模板，克隆PBGS编码基因，纯化后经双酶切，连接进入pET28a+，得到表达载体pET28a+-cghemB；S2、对克隆PBGS单亚基结构进行从头预测结构建模，基于单亚基与5-ALA的对接模型结构设计突变体；S3、表达载体转入大肠杆菌，基于S2所述对接模型，选取突变位点，用定点突变试剂盒进行定点突变，获得重组菌株；S4、分析重组菌株重组谷氨酰胺PBGS酶活力，获取低于cgPBGS酶活力同时又具备活性的突变体。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 四川师范大学 一种PBGS低酶活性突变体及其构建方法
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