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申请/专利权人:安徽农业大学
摘要:本发明提供了一种基于全基因组DNA甲基化和转录组联合分析筛选梨果实石细胞发育差异基因的方法:S1、提取“石细胞含量高”和“石细胞含量低”的两个梨品种果实总DNA和总RNA;S2、DNA甲基化检测与转录组测序;S3、对DNA甲基化测序结果分析,筛选具有差异甲基化区DMR的基因;对转录组测序结果分析,筛选差异表达基因DEG;联合分析,筛选出表达量和DNA甲基化同时存在差异的基因;GO富集和KEGG富集分析。本发明能够通过融合DNA甲基化组数据和转录组数据挖掘目标基因,实现明联合分析甲基组数据和转录组数据,具有更全面的数据结果解释,为深入了解梨的遗传调控网络,为梨分子育种提供新的思路和策略。
主权项:1.一种基于全基因组DNA甲基化和转录组联合分析筛选梨果实石细胞发育差异基因的方法,其特征在于,包括如下步骤:S1、提取梨果实总DNA、总RNA分别提取“石细胞含量高”和“石细胞含量低”两个梨品种的梨果实总DNA,并进行总DNA样品检测;同时,提取两个梨品种的梨果实总RNA;S2、DNA甲基化检测与转录组测序①DNA甲基化检测:分别对提取的两个梨品种的梨果实总DNA进行全基因组甲基测序;超声处理基因组DNA片段化至200~300bp,然后进行末端修复和腺苷酸化;使用甲基化试剂盒处理DNA片段若干次;对制备的文库进行测序,并进行碱基检测;②转录组测序:分别对提取的两个梨品种的梨果实总RNA进行反转录生成相应的cDNA文库,并进行测序;同时,采用qRT-PCR对各文库有效浓度进行定量,保证文库质量;S3、生物信息学分析对DNA甲基化测序结果进行分析,并利用统计模型区分甲基化信号和背景变异信号,筛选出具有甲基化信号的胞嘧啶位点;根据具有甲基化信号的胞嘧啶位点和差异甲基化位点的阈值,确定差异甲基化位点;进而筛选出两个梨品种中“具有差异甲基化区DMR的基因”;对转录组测序结果进行转录组分析,筛选出两个梨品种“差异表达基因DEG”;进行DNA甲基化组与转录组的联合分析,筛选出“表达量和DNA甲基化同时存在差异的基因”;对联合分析筛选的差异基因进行GO富集分析和KEGG富集分析。
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