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一种肿瘤组织内血管生成拟态结构的识别方法 

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申请/专利权人:复旦大学

摘要:本发明公开了一种肿瘤组织内血管生成拟态结构的识别方法,属于医学检测技术领域。本发明提供的染色识别成像方法可以成功地识别血管生成拟态vasculogenicmimicry,VM,解决了二维切片、染色观察中效率低下的问题,可以在一块组织中观察连续的多个层面,不仅有着更高的效率,同时可以连续地追踪血管,明确其走行。本发明对VM的研究具有重要的参考价值,有助于进一步对VM与某些蛋白的共定位,或是其与其他结构如神经分布之间的关系进行研究,并提供了一种强有力的工具,有着广阔的应用前景。

主权项:1.一种肿瘤组织内血管生成拟态结构的识别方法,其特征在于,所述识别方法包括以下步骤:1将大于等于2000kD的FITC-dextran静脉注射入含有肿瘤的动物体内,后取出动物体内的肿瘤组织;2利用4-6%PFA进行肿瘤组织固定,再用PBS清洗;3常温下使用梯度甲醇或乙醇脱水,每次0.8-1.2h;4于4℃100%甲醇或乙醇内浸泡0.8-1.2h;566%DCM33%甲醇或乙醇内常温震荡过夜;6100%甲醇或乙醇常温清洗,并置于4℃过夜;75%H2O295%甲醇或乙醇漂白4℃并过夜;8梯度甲醇或乙醇复水,常温下每次0.8-1.2h;9于PTx.2内清洗组织,常温下每次0.8-1.2h,共两次;10于PermeabilizationSolution中孵育,37℃,n2天;11封闭液封闭,37℃,n2天;12于PTwH5%DMSO3%DonkeySerum孵育CD31抗体,37℃,n天;13在PTwH中洗涤4-5次,直到第二天;14于PTwH3%DonkeySerum孵育二抗,37℃,n天;15在PTwH中洗涤4-5次,直到第二天;16梯度甲醇或乙醇脱水,常温下每次0.8-1.2h;1766%DCM33%甲醇或乙醇内常温震荡,2.5-3.5h;18100%DCM孵育15min,同时震荡,以洗去甲醇;19静置于DBE,待成像前,倒置试管以匹配折光度,配合之后的成像;所述n为组织最大径厘米数。

全文数据:

权利要求:

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