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申请/专利权人：深圳源兴基因技术有限公司
摘要：本发明涉及生物病毒技术领域，公开了一种高效去除HCD残留的痘苗病毒纯化工艺，方法步骤包括如下：首先对病毒收获液进行澄清处理；然后用中空纤维柱对澄清液进行浓缩和洗滤；接着对浓缩液进行酶切处理；最后使用复合层析对酶切样品进行精纯，最终样品HCD残留量可降至10ng剂量以下。该高效去除HCD残留的痘苗病毒纯化工艺，有效减少病毒聚集体的形成，极大地提高了酶切去除HCD的效率，仅通过酶切就可以将HCD降至10ng剂量以下，避免了使用离子交换层析从而影响产量以及增加无菌风险，适用于痘苗病毒从实验室规模至商业化的生产，直接避免使用离子交换层析，纯化工艺更加简单。
主权项：1.一种高效去除HCD残留的痘苗病毒纯化工艺，其特征在于，方法步骤包括如下：S1、首先对病毒收获液进行澄清处理；病毒收获液用孔径0.45μm~5μm的过滤器或孔径0.45μm~0.65μm的中空纤维柱进行澄清处理；S2、然后用中空纤维柱对澄清液进行浓缩和洗滤；用100KD~0.1μm中空纤维柱或膜包将澄清液浓缩至目标浓度，然后用洗滤液将浓缩液洗滤3~8次，排空中空纤维柱管路，收集浓缩液；S3、接着对浓缩液进行酶切处理；向浓缩液中加入终浓度为10~1000mM的NaCl、0.1%~3%的聚山梨酯80或聚山梨酯20和5~250UmL的核酸酶，酶切反应20min以上；S4、最后使用复合层析对酶切样品进行精纯，最终样品HCD残留量可降至10ng剂量以下；将复合层析填料用NaOH溶液消毒以及缓冲液平衡后将酶切收样品上样和洗脱收集病毒峰。
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