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申请/专利权人：中国林业科学研究院高原林业研究所
摘要：本发明属于分子生物学实验领域，尤其是一种云南松枝条总DNA提取方法，针对现有的DNA严重降解且杂质含量高会致使有效分子数据量捕获效率降低，严重影响科研结论的完整性和正确性的问题，现提出如下方案，其包括以下步骤：步骤一、树枝条硅胶干燥：野外采集带有芽的枝条，弃芽后剪段装入盛有硅胶的密封袋中，带回实验室室温干燥；步骤二、液氮研磨：用锋利剪刀将枝条剪碎，本发明能充分裂解释放枝条中DNA，可有效地去除多糖、酚类及松脂等杂质，使所提DNA高质高量，在DNA凝胶成像时主带明显，胶孔中无杂质沉积，超微量分光光度计检测DNA浓度和纯度高，DNA能成功进行后续的PCR扩增等分子实验。
主权项：1.一种云南松枝条总DNA提取方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、树枝条硅胶干燥：野外采集带有芽的枝条，弃芽后剪段装入盛有硅胶的密封袋中，带回实验室室温干燥；步骤二、液氮研磨：用锋利剪刀将枝条剪碎，在研钵中放入PVP和液氮将枝条研磨至粉末状；步骤三、木粉过筛：研磨好的木粉过100目筛后装入2.0mL灭菌离心管；步骤四、裂解释放DNA：加入裂解液，水浴对粉末状样品进行裂解释放DNA，DNA裂解液由4×CTAB、60mgmL纤维素酶、20mgmL蛋白酶K、20％PVP和99％β-巯基乙醇，体积比为1000:20:30:200:50；裂解温度为水温65℃，水浴时间为3h；步骤五、抽提DNA：利用苯酚、氯仿和异戊醇对经过裂解消化处理的样本进行DNA抽提；步骤六、挑取DNA：利用冰冻无水乙醇沉淀DNA时候，用灭菌枪头挑取絮状DNA至1.5mL灭菌离心管中；步骤七、洗涤DNA：用75％的乙醇清洗DNA；步骤八、溶解DNA：清洗干净的DNA室温风干后，加入灭菌ddH2O于4℃冰箱中溶解；步骤九、检测DNA：通过琼脂糖凝胶电泳直观检测DNA；通过超微量分光光度计检测DNA浓度和纯度。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 中国林业科学研究院高原林业研究所 一种云南松枝条总DNA提取方法
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