买专利卖专利找龙图腾，真高效！ 查专利查商标用IPTOP,全免费！专利年费监控用IP管家,真方便！

申请/专利权人：深圳大学

摘要：本发明公开了一种基于干扰或敲除人PCSK9基因制备增强型CAR‑T细胞的方法及应用，涉及CAR‑T细胞制备技术领域，包括利用人工microRNA（miRNA）对PCSK9进行RNA干扰（RNAi）制备增强型CAR‑T和利用CRISPR‑Cas9基因编辑技术敲除PCSK9制备增强型CAR‑T。本发明采用一种基于干扰或敲除人PCSK9基因制备增强型CAR‑T细胞的方法及应用，通过PCSK9基因敲减元件或者CRISPRCas9技术，特异性地敲减或敲除CAR‑T细胞中PCSK9的表达，有效增强CAR‑T细胞对恶性实体肿瘤的治疗作用，并且能增强免疫检查点阻断疗法的肿瘤治疗效果。

主权项：1.一种基于干扰或敲除人PCSK9基因制备增强型CAR-T细胞的方法，其特征在于：利用人工miRNA对人PCSK9基因进行RNA干扰制备增强型CAR-T或通过CRISPR-Cas9基因编辑技术利用sgRNA敲除人PCSK9基因制备增强型CAR-T；人工miRNA是以miR-155为骨架，将miR-155茎环结构中的miRNA序列替换为干扰人PCSK9基因表达的miRNA片段制备得到，干扰人PCSK9基因表达的miRNA片段为：miRNA#603-guidesequencepassengersequence、miRNA#792-guidesequencepassengersequence；miRNA#603-guidesequence的核苷酸序列如SEQIDNO.13所示，miRNA#603-passengersequence核苷酸序列如SEQIDNO.14所示；miRNA#792-guidesequence的核苷酸序列如SEQIDNO.15所示，miRNA#792-passengersequence核苷酸序列如SEQIDNO.16所示；人工miRNA包括miRNA#603和miRNA#792，miRNA#603的核苷酸序列为SEQIDNO.19，miRNA#792的核苷酸序列为SEQIDNO.20；sgRNA包括sgRNA#1、sgRNA#6，sgRNA#1的spacer序列为SEQIDNO.22，sgRNA#6的spacer序列为SEQIDNO.23；将sgRNA化学合成即用型后应用于CRISPR-Cas9基因编辑技术敲除人PCSK9基因制备增强型CAR-T，即用型sgRNA包括即用型sgRNA#1和即用型sgRNA#6，即用型sgRNA#1核苷酸序列如SEQIDNO.24所示，即用型sgRNA#6核苷酸序列如SEQIDNO.25所示。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 深圳大学 一种基于干扰或敲除人PCSK9基因制备增强型CAR-T细胞的方法及应用