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申请/专利权人：辽宁工程技术大学
摘要：本发明属于生物工程技术领域，具体为工程菌菌种改良选育以及微生物产酶优化技术领域，特别涉及一种基于基因敲除提高乳酸克鲁维酵母外源蛋白表达的方法，用于提高乳酸克鲁维酵母外源蛋白表达能力。方法包括构建基因敲除载体、获得基因敲除转化子以及将获得的基因敲除转化子用于外源蛋白的表达。本发明对乳酸克鲁维酵母进行基因敲除改造后，用于酶工程和发酵工程中，提高外源蛋白的表达能力。
主权项：1.基于基因敲除提高乳酸克鲁维酵母外源蛋白表达的方法，其特征在于，包括如下步骤：1构建基因敲除载体：101从乳酸克鲁维酵母基因组中扩增目的基因KlGAS1-1的上游同源臂序列和下游同源臂序列，从带有筛选标记抗性基因的质粒中扩增筛选标记抗性基因序列；102通过双融合PCR法将上游同源臂序列、筛选标记抗性基因序列、下游同源臂序列融合；103利用一对分别位于上游同源臂序列、下游同源臂序列中的巢式PCR引物，扩增获得最终的基因敲除载体；2获得基因敲除转化子：201将步骤1中构建好的基因敲除载体通过电击转化法导入乳酸克鲁维酵母感受态细胞；202将导入基因敲除载体的乳酸克鲁维酵母感受态细胞进行培养，使用菌落PCR法提取培养后菌落中的DNA，筛选验证正确敲除目的基因KlGAS1-1的转化子，保存待用；3将获得的基因敲除转化子用于外源蛋白的表达。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 辽宁工程技术大学 基于基因敲除提高乳酸克鲁维酵母外源蛋白表达的方法
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