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一种靶向奶山羊CSN2基因座制备重组人丁酰胆碱酯酶定向整合的山羊胎儿成纤维细胞株的方法 

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申请/专利权人:中国人民解放军军事科学院军事医学研究院

摘要:本发明公开了一种靶向奶山羊CSN2基因座制备重组人丁酰胆碱酯酶定向整合的山羊胎儿成纤维细胞株的方法。本发明首次利用CRISPRCas9基因编辑技术在奶山羊CSN2基因座上设计了供定点整合目的基因的位点,既解决了插入位点不确定引起的表达稳定性和生物安全性的问题,又解决了大片段载体容易突变和影响转染效率的问题,同时,将目的蛋白序列直接插入奶山羊CSN2基因中,避免了大段外源序列的插入,也最大程度保证了生物的安全性。

主权项:1.rhBChE基因在山羊CSN2基因座上定位整合的重组载体HAs-P2A-rhBChE,其特征在于,所述的重组载体HAs-P2A-rhBChE包含CRISPRCas9介导的靶向山羊CSN2基因座进行定位整合的打靶载体PX458-sgRNA4,采用P2A连接目的基因rhBChE基因改造成的同源定向修复重组载体,所述的打靶载体PX458-sgRNA4是根据山羊CSN2基因序列,设计并合成靶向山羊CSN2基因的sgRNA4,然后在商业化载体PX458质粒的打靶载体骨架上增加sgRNA4构成的,所述sgRNA4的序列如SEQIDNo.1所示;mCherry基因在山羊CSN2基因座上定位整合的重组载体HAs-P2A-mCherry,其特征在于,所述的重组载体HAs-P2A-mCherry包含所述的CRISPRCas9介导的靶向山羊CSN2基因座进行定位整合的打靶载体PX458-sgRNA4,采用P2A连接目的基因mCherry基因改造成的同源定向修复重组载体,所述mCherry基因指红色荧光蛋白报告基因。

全文数据:

权利要求:

百度查询: 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 一种靶向奶山羊CSN2基因座制备重组人丁酰胆碱酯酶定向整合的山羊胎儿成纤维细胞株的方法

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