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申请/专利权人：江苏运动健康研究院

摘要：本发明涉及一种基于无膜式器官芯片构建肝纤维化模型的方法，包括：培养肝类器官、肝星状细胞、库普弗细胞；基于所培养的细胞采用自重力驱动的无膜芯片构建肝类器官的共培养模型；基于不同诱导条件对所述共培养模型进行纤维化诱导，获得肝纤维化模型；所述自重力驱动模式的无膜芯片包括依次设置的三个通道，相邻通道间设有导向结构，且无膜阻挡。本发明基于三通道无膜芯片构建肝脏类器官与肝星状细胞和KCs细胞共培养体系，采用内毒素和不饱和脂肪酸刺激的方式，通过不同时间条件模拟肝炎到脂肪肝再到肝纤维化的表型。与单独培养肝类器官模型相比，本发明的共培养肝纤维化模型具有更敏感的刺激反应性以及更真实的肝炎‑肝纤维化表型。

主权项：1.一种基于无膜式器官芯片构建肝纤维化模型的方法，其特征在于，包括：S1、细胞培养，包括培养肝类器官、肝星状细胞、库普弗细胞；S2、基于所培养的细胞采用自重力驱动的无膜芯片构建肝类器官的共培养模型；S3、基于不同诱导条件对所述共培养模型进行纤维化诱导，获得肝纤维化模型；所述自重力驱动模式的无膜芯片包括依次设置的A、B、C三个通道，相邻通道间设有导向结构，且无膜阻挡；所述共培养模型的构建，包括：S21、对所述肝类器官、肝星状细胞、库普弗细胞分别进行悬重混合、收集，获得包含肝类器官的基质胶、分别包含肝星状细胞和库普弗细胞的细胞悬液，使肝类器官、肝星状细胞、库普弗细胞数量比为25～35:1:5～10；S22、将所述包含肝类器官的基质胶注入所述无膜芯片的B通道，然后转移到培养箱中静置，待胶凝固后进行后续操作；S23、将肝星状细胞悬液、库普弗细胞悬液依次注入无膜芯片的其余两个通道，对每个通道加样完成之后，将无膜芯片以设定的倾斜角度放置一段时间；S24、待三通道内细胞均铺满稳定后，向无膜芯片的A、C通道内各补充共培养基，所述共培养基由所述细胞培养时培养三种细胞所需的培养基按照1:1:1制备而成；S25、将无膜芯片放置在培养箱内的摇摆灌注仪上进行培养；所述基于不同诱导条件对所述共培养模型进行纤维化诱导，获得肝纤维化模型，包括：待共培养模型的B通道内类器官直径达设定值，使用内毒素脂多糖或者内毒素脂多糖和不饱和脂肪酸的组合，对共培养模型进行不同时间的诱导处理，获得对应的肝纤维化模型。

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