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申请/专利权人：南京瑞源生物技术有限公司

摘要：本发明公开了一种基于植物样品的酵母膜文库构建方法，包括以下步骤：S1、植物材料以及菌株的保存与培养；S2、提取植物材料RNA；S3、三框cDNA的合成，均一化与小片段去除；S4、双链cDNA与pPR3‑N同源重组，质粒转化大肠杆菌，获得基于植物样品的酵母膜文库，并进行文库鉴定；S5、文库质粒大抽，筛选出植物样品的酵母膜文库。本发明可提升植物类样品酵母膜文库构建的技术指标，提升产品品质，降低生产成本。

主权项：1.一种基于植物样品的酵母膜文库构建方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、植物材料以及菌株的保存与培养；S2、提取植物材料RNA；S3、三框cDNA的合成，均一化与小片段去除；S4、双链cDNA与pPR3-N同源重组，质粒转化大肠杆菌，获得基于植物样品的酵母膜文库，并进行文库鉴定；S5、文库质粒大抽，筛选出植物样品的酵母膜文库；S3中三框cDNA的合成方法为，先将mRNA逆转录成单链cDNA，然后以P1-F、P2-F、P3-F、P4-R引物为三框引物合成三框cDNA；mRNA逆转录成单链cDNA时利用的CDSIII3'PCRPrimer和SMARTIVOligonucleotide反转录，其中CDSIII3'PCRPrimer的序列为：AAGCAGTGGTATCAACGCAGAGTGGCCATTATGGCCGGG；SMARTIVOligonucleotide的序列为：ATTCTAGAGGCCGAGGCGGCCGACATGTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTVN；S3中三框引物的序列如下：P1-F引物的序列为：TACGATGTTCCAGATTACGCTGGATCCAAGCAGTGGTATCAACGCAGAGTGG；P2-F引物的序列为：TACGATGTTCCAGATTACGCTGGATCCAAAGCAGTGGTATCAACGCAGAGTGG；P3-F引物的序列为：TACGATGTTCCAGATTACGCTGGATCCAAAAGCAGTGGTATCAACGCAGAGTGG；P4-R引物的序列为：GGTATCGATAAGCTTGATATCGAATTCCTAGAGGCCGAGGCGGCCGACATG；S3中均一化与小片段去除的方法为依次进行杂交处理、消化处理和消化后扩增。

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