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申请/专利权人：中泽赛奥(海南)生物科技有限公司
摘要：本发明公开了一种CAR‑NK细胞、抗肿瘤增效复合物及其应用。该技术方案设计了具有更优靶向性的CAR基因，通过基因转导构建CAR‑NK细胞，并优化了扩增工艺。具体来看，本发明构建含有信号肽序列、CAR的胞外段或靶向肿瘤抗原配体的抗体单链可变区序列、铰链区、跨膜结构域、共刺激信号分子、CD3ζ的胞浆信号传导序列的CAR基因，所述CAR基因的序列中同时具有实体瘤缺氧微环境可激活的启动子；将所述CAR基因插入反转录病毒载体中；将制备好的反转录病毒载体加入到MEM培养基中，并将其与NK细胞共培养，通过病毒转染使NK细胞摄取病毒颗粒并转导CAR基因，得到CAR‑NK细胞；细胞经两级培养，进行无菌检测后收获。本发明显著提高了CAR‑NK细胞的抗肿瘤活性和细胞扩增效率。
主权项：1.CAR-NK细胞，其特征在于是由以下方法制备的：构建含有信号肽序列、CAR的胞外段或靶向肿瘤抗原配体的抗体单链可变区序列、铰链区、跨膜结构域、共刺激信号分子、CD3ζ的胞浆信号传导序列的CAR基因，所述CAR基因的序列中同时具有实体瘤缺氧微环境可激活的启动子；将所述CAR基因插入反转录病毒载体中；将制备好的反转录病毒载体加入到MEM培养基中，并将其与NK细胞共培养，通过病毒转染使NK细胞摄取病毒颗粒并转导CAR基因，得到CAR-NK细胞；分离单核细胞后洗涤，加入含BK-AEC-IL2的淋巴细胞无血清培养基，重悬；将CD3单抗包被好的透气盖细胞培养瓶中的保护液吸出，再将细胞悬液转移到包被过的细胞培养瓶中，置于培养箱中37℃，5％CO2培养3～4d；转移至细胞培养袋培养，扩增到1-3×109以上；经无菌检测后收获。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 中泽赛奥(海南)生物科技有限公司 CAR-NK细胞、抗肿瘤增效复合物及其应用
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