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申请/专利权人：潍坊市润生畜禽良种有限公司

摘要：本发明涉及抗体检测技术领域，尤其涉及一种GCGR卵黄抗体的检测方法。该方法包括抗体制备、酶标板的抗原包被、加入封闭液封闭、添加样品、添加抗体、显色和读取结果。本发明通过使用特定的免疫方案和抗原诱导蛋鸡产生靶向卵黄抗体，增加特异性、减少交叉反应性并提高检测的灵敏度，且可以检测低浓度的抗体，通过改变免疫间隔和监测OD450、PN值，优化免疫过程，以实现获取更高水平的抗体，提高抗体产量的有效性和效率，从而提高检测的整体可靠性，采用稀释、离心和纯化过程，从蛋黄中提取抗体，确保抗体制备的一致性和高质量，通过抗原包被、封闭、样品添加和检测过程，最大限度地减少变异性并提高测试的准确性。

主权项：1.一种优化GCGR卵黄抗体制备的方法，其特征在于，包括，制备样品，所述制备样品的过程包括，用抗原免疫蛋鸡，按照免疫计划进行多次免疫注射，所述抗原为GCGR蛋白或其GCGR肽段；以预设的采集间隔收集鸡蛋作为蛋样，分离蛋黄，以提取GCGR卵黄抗体粗提液，各预设的采集间隔的时间长度均不同；实时监测所述样品中GCGR卵黄抗体的含量，根据实际监测结果确定是否调整下一免疫注射的实际抗原剂量和距离下次免疫注射的实际免疫间隔；根据每次监测的实际结果确定是否得到标准免疫时间条件；其中，对于每次采集间隔实际采集的各待检测样品，获取对应的实时GCGR卵黄抗体浓度，将预设浓度范围与实时GCGR卵黄抗体浓度进行对比，根据对比结果确定下一免疫注射的实际抗原剂量；设定有预设浓度范围、第一预设浓度和第二预设浓度；若实时GCGR卵黄抗体浓度在预设浓度范围内，以预设添加剂量作为下一免疫注射实际抗原剂量；若实时GCGR卵黄抗体浓度不在预设浓度范围内，以第一修正添加剂量或第二修正添加剂量作为下一免疫注射的实际抗原剂量；其中，实时GCGR卵黄抗体浓度表示各所述待检测样品的GCGR卵黄抗体浓度的平均值；根据第一预设浓度和第二预设浓度对实时GCGR卵黄抗体浓度进行判定，若实时GCGR卵黄抗体浓度小于第一预设浓度，以第一修正添加剂量作为下一免疫注射的实际抗原剂量；若实时GCGR卵黄抗体浓度大于第二预设浓度，以第二修正添加剂量作为下一免疫注射的实际抗原剂量；其中，Qi+11’=min{Qi+1×[1+Ac1-AsAc1]，ΔQ}，Qi+12’=min{Qi+1×[1-As-Ac2As]，ΔQ}；As为实时GCGR卵黄抗体浓度，Ac1为第一预设浓度，Ac2为第二预设浓度，ΔQ为免疫剂量波动阈值，ΔQ=50μg，Qi+1为下一实际免疫间隔的实际抗原剂量，Qi+11’为第一修正添加剂量，Qi+12’为第二修正添加剂量，i表示当前免疫间隔为对第i次免疫进行检测；绘制各所述待检测样品中阳性样品对应的平均GCGR卵黄抗体浓度随时间的变化曲线，得到抗体水平变化图，根据所述抗体水平变化图的变化趋势确定是否对下一免疫间隔的时间长度进行调整；其中，根据相邻免疫间隔的实时抗体水平变化速度、标准变化速度与实时抗体水平变化速度的对比结果和第二预设浓度与实时GCGR卵黄抗体浓度的对比结果确定所述变化趋势。

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