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申请/专利权人：武汉生物样本库有限公司

摘要：本发明公开了一种基于GC‑MS或GC‑MSMS测定粪便、血浆和尿液样本中短链脂肪酸含量的方法，属于气质联用检测短链脂肪酸技术领域；先配制不同浓度的含有11种短链脂肪酸的混合标准工作液，加入酸液和内标，进行GC‑MS检测，获得相应的线性回归方程；然后取人或动物的粪便、血浆或尿液样本，加入酸液预处理；先后加入第一萃取液，第二萃取液和内标，冰上涡旋振荡，冰水浴超声，离心取上清液，进行GC‑MS或GC‑MSMS检测，与线性回归方程比对，获得11种短链脂肪酸的含量。本发明提供的定量检测方法能够快速准确的对生物样本中SCFAs含量较高的肠道内容物如粪便及血浆、尿液中痕量SCFAs的精准检测，样本用量少、检测灵敏度高、适用广泛的优点。

主权项：1.基于GC-MS或GC-MSMS测定粪便、血浆和尿液样本中短链脂肪酸含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、配制不同浓度的含有11种短链脂肪酸的混合标准工作液，加入酸液和内标，进行GC-MS或GC-MSMS检测，以11种短链脂肪酸的峰面积与内标峰面积之比为纵坐标，短链脂肪酸的浓度为横坐标，获得相应的线性回归方程；11种短链脂肪酸分别为乙酸、丙酸、异丁酸、丁酸、异戊酸、戊酸、甲基戊酸、己酸、2-甲基己酸、正庚酸和正辛酸；S2、取人或动物的粪便、血浆或尿液样本，加入酸液进行预处理；然后加入第一萃取液，涡旋、振荡；再加入第二萃取液，涡旋、振荡；再加入内标，在冰上涡旋振荡，冰水浴中超声处理，离心取上清液；所述第一萃取液为体积比1:1的甲基叔丁基醚、正己烷混合液，所述第二萃取液为正己烷；S3、取步骤S2的上清液进行GC-MS或GC-MSMS检测，与步骤S1中相应的线性回归方程进行比对，获得11种短链脂肪酸的含量；步骤S3中，气相色谱分析条件为：采用毛细管色谱柱HP-INNOWAX分离，规格为30m×0.25mm×0.25μm；进样口温度260℃，进样量1μL，分流比10:1；载气：氦气，柱流量1mLmin；色谱柱初始温度50℃，以5℃min速率升温至150℃，再以10℃min升温至250℃，保持2min；使用GC-MS检测时，质谱条件为：采用单四级杆质谱，SIM采集模式，电子电离EI源，离子化电压为70eV；离子源温度230℃；四级杆温度150℃；传输线温度280℃；溶剂延迟时间6min；以空白为背景，质谱图均为扣除背景的结果；使用GC-MSMS检测时，质谱条件为：采用三重四级杆质谱，MRM采集模式，电子电离EI源，离子化电压为70eV；离子源温度230℃；四级杆温度150℃；传输线温度260℃；溶剂延迟时间6min；以空白为背景，质谱图均为扣除背景的结果。

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