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申请/专利权人：天津市儿童医院;天津大学
摘要：本发明公开了一种胆道闭锁患儿肝内胆管立体成像的免疫荧光方法，包括：标本固定；改良免疫荧光方法使其能够对肝内胆管进行标记；利用3DISCO方法对肝脏组织进行透明化，使肝脏组织可保持荧光信号并达到透明化效果；调试双光子显微镜，选择合适的滤光片进行成像。本发明主要适用于肝内胆管也可推及肝内血管的成像，通过对肝脏组织进行改良免疫荧光染色及透明化处理，使激光能够顺利穿透组织进行胆管成像。
主权项：1.一种胆道闭锁患儿肝内胆管立体成像的免疫荧光方法，其特征在于，所述方法包括：步骤一、肝脏组织利用4-10％福尔马林溶液固定，修剪为5*5*5mm3大小，利用PBS洗涤；步骤二、第一步处理后的肝脏组织采用过氧化氢溶液进行漂白，PBS洗涤；步骤三、第二步处理后的肝脏组织利用FLASH溶液抗原修复，0.2％PBT溶液洗涤；步骤四、第三步处理后的肝脏组织利用胎牛血清封闭液封闭；步骤五、第四步处理后的肝脏组织采用一抗10-15℃孵育，洗涤后采用二抗同等条件孵育；一抗为胆管标记物，二抗为带荧光标记的山羊抗兔IgGHL抗体；步骤六、第五步处理后的肝脏组织经苏丹黑B溶液处理，然后用0.02％TBST溶液洗涤；步骤七、第六步处理后的肝脏组织利用梯度浓度四氢呋喃溶液脱水、二氯甲烷脱脂；并利用二苄醚匹配折射率；步骤八、第七步处理后的处理后的肝脏组织利用艾里光束采用高通量显微镜进行Z轴拍摄。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 天津市儿童医院 天津大学 一种胆道闭锁患儿肝内胆管立体成像的免疫荧光方法
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