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一种构建β地中海贫血CD17位点突变的HUDEP-2细胞株的引导编辑系统及方法 

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申请/专利权人:云南省第一人民医院

摘要:本发明公开了一种构建β地中海贫血CD17位点突变的HUDEP‑2细胞株的引导编辑系统及方法,属于基因编辑技术领域,所述引导编辑系统包括:nCas9mRNA、工程化引导编辑gRNA和HUDEP‑2细胞株,所述引导编辑方法包括以下步骤:制备mRNA和gRNA,细胞准备,电转操作,细胞恢复和检测编辑效果。本发明的一种构建β地中海贫血CD17位点突变的HUDEP‑2细胞株的引导编辑系统及方法增加了pegRNA和nickRNA的稳定性,在提高编辑效率和降低脱靶率的同时,获得了高效安全的β地中海贫血CD17位点突变的HUDEP‑2细胞株。

主权项:1.一种构建β地中海贫血CD17位点突变的HUDEP-2细胞株的引导编辑系统,其特征在于,包括:nCas9mRNA、工程化引导编辑gRNA和HUDEP-2细胞株,所述nCas9mRNA为PEmax酶mRNA,所述PEmax酶mRNA的核苷酸序列如SEQNO.1所示;所述工程化引导编辑gRNA包括:epegRNA和nickRNA,所述epegRNA的核苷酸序列如SEQNO.2所示,所述nickRNA的核苷酸序列包括:nickRNA1核苷酸序列、nickRNA2核苷酸序列和nickRNA3核苷酸序列,所述nickRNA1核苷酸序列如SEQNO.3所示,所述nickRNA2核苷酸序列如SEQNO.4所示,所述nickRNA3核苷酸序列如SEQNO.5所示;所述HUDEP-2细胞株的核苷酸序列如SEQNO.6所示,所述HUDEP-2细胞株的PAM核苷酸序列如序列SEQNO.7所示。

全文数据:

权利要求:

百度查询: 云南省第一人民医院 一种构建β地中海贫血CD17位点突变的HUDEP-2细胞株的引导编辑系统及方法

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