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申请/专利权人：中国烟草总公司郑州烟草研究院;四川中烟工业有限责任公司

摘要：本发明提供了一种雪茄烟叶早期霉变监测方法，包括自然霉变样品制备、自然霉变样品检测、人工霉变样品制备、人工霉变样品检测、霉变标志物确定和在线监测霉变状态等步骤。本发明还提供了一种雪茄烟叶霉变标志物，包括1‑辛烯‑3‑醇、1‑戊醇和戊醛。所以，利用上述雪茄烟叶霉变早期监测方法，可以增强霉变标志物的确定性和准确性，提高检测结果的有效性，有利于实现雪茄烟叶霉变早期的监测与识别，该监测方法成本低、方便快捷、减少人工霉变识别的误差，弥补感官分析的缺陷；能够及时客观地判断仓储雪茄烟叶是否发生霉变，保证雪茄烟叶品质，降低雪茄烟的生产成本；同时也为雪茄烟叶的中后期的霉变控制提供依据。

主权项：1.一种雪茄烟叶早期霉变监测方法，包括步骤：自然霉变样品制备：从自然霉变雪茄烟叶中分离培养出致霉的至少一种优势菌种原种，将每一种优势菌种原种在培养基中进行培养，并采用顶空法制备对应的自然霉变样品；自然霉变样品检测：对每一种优势菌种自然霉变样品进行GC-IMS检测，通过数据处理和谱图分析，确定自然霉变样品的潜在霉变标志物与霉变程度；其中，所述自然霉变样品检测的步骤进一步包括：检测自然霉变样品：采用GC-IMS法同步检测每一种优势菌种的自然霉变样品，获得每一种优势菌种不同霉变时期的自然霉变样品的GC-IMS峰体积数据、GC-IMS三维信息谱图及GalleryPlot图；自然霉变数据处理：对多个所述优势菌种的多个自然霉变样品的GC-IMS峰体积数据进行定性与半定量分析，结合单因素方差分析法和邓肯极差法对每一种优势菌种的自然霉变样品的GC-IMS峰体积数据进行分析，初步预判每一种优势菌种的自然霉变样品的可能霉变标志物；将多种优势菌种的自然霉变样品的可能霉变标志物中重叠的化合物初次判断为自然霉变样品可能的霉变标志物；结合单因素方差分析法，根据每一种优势菌种的自然霉变样品的GC-IMS峰体积数据的显著性差异水平，初次判断每一种优势菌种自然霉变样品可能的霉变程度；自然霉变谱图分析：对比分析每一种优势菌种的自然霉变样品的GC-IMS三维信息谱图和GalleryPlot图，根据每一种优势菌种的不同自然霉变样品之间的差异性，以再次判断每一种优势菌种的自然霉变样品可能的霉变程度；自然霉变PLS-DA分析：利用PLS-DA分析法，以每一种优势菌种的自然霉变样品中的挥发性成分与自然霉变样品的霉变时期之间的关系分别建立每一种优势菌种的自然霉变样品的PLS-DA模型，以验证前述各步骤给出的关于相应优势菌种的自然霉变样品可能的霉变程度的判断结果；若针对每一种优势菌种的自然霉变样品可能的霉变程度的验证结果一致，则综合前述步骤判断的每一种优势菌种的自然霉变样品可能的霉变程度确定自然霉变样品的可能的霉变程度；先利用各PLS-DA模型以VIP＞1筛选对应优势菌种的自然霉变样品可能的霉变标志物，再将由PLS-DA模型筛选出的多种优势菌种的自然霉变样品可能的霉变标志物中重叠的化合物确定为自然霉变样品的潜在霉变标志物；人工霉变样品制备：将每一种优势菌种原种接种至未霉变雪茄烟叶样品中进行培养，并采用顶空法制备对应的人工霉变样品；人工霉变样品检测：对每一种优势菌种人工霉变样品进行GC-IMS检测，通过数据处理、视觉霉变观察和谱图分析，确定人工霉变样品的潜在霉变标志物与霉变程度；其中，所述人工霉变样品检测的步骤进一步包括：检测人工霉变样品：采用GC-IMS法同步检测每一种优势菌种的人工霉变样品，获得每一种优势菌种的不同霉变时期的人工霉变样品的GC-IMS峰体积数据、GC-IMS三维信息谱图及GalleryPlot图；人工霉变数据处理：采用与所述自然霉变数据处理步骤相同的方法，初次判断人工霉变样品可能的霉变标志物与霉变程度；人工霉变视觉观察：采用人工观察并记录每一种优势菌种的人工霉变样品不同霉变时期的形态图，从外观上再次判断每一种优势菌种的人工霉变样品的霉变程度；人工霉变谱图分析：采用与所述自然霉变谱图分析步骤相同的方法，第三次判断每一种优势菌种的人工霉变样品的霉变程度；人工霉变PLS-DA分析：采用与所述自然霉变PLS-DA分析步骤相同的方法，建立每一种优势菌种的人工霉变样品的PLS-DA模型，验证前述各步骤给出的关于所述每一种优势菌种的人工霉变样品可能的霉变程度的判断结果，并依次确定人工霉变样品的可能的霉变程度和潜在霉变标志物；霉变标志物确定：对比由自然霉变样品确定的潜在霉变标志物及霉变程度和由人工霉变样品确定的潜在霉变标志物及霉变程度，将两者重叠的霉变标志物确定为雪茄烟叶的早期霉变标志物；在线监测霉变状态：先采用顶空法将被监测的雪茄烟叶制成待测样品，再采用GC-IMS法检测所述待测样品中的早期霉变标志物的峰体积值，以判断所述待测样品是否发生霉变。

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