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申请/专利权人：江苏省农业科学院
摘要：靶向新城疫病毒和H9亚型禽流感病毒的重组双特异性纳米抗体及其制备方法和应用，属于生物技术领域。本发明从免疫羊驼的VHH噬菌体文库中筛选出两条分别针对新城疫病毒和H9亚型禽流感病毒的重链抗体可变区序列，通过柔性连接肽连接后定向克隆至载体pPIC9K构建重组质粒，转化至毕赤酵母X‑33感受态细胞中筛选用于表达重组双特异性纳米抗体的工程菌株，经甲醇诱导，收集上清并纯化后获得能同时靶向新城疫病毒和H9亚型禽流感病毒的重组双特异性纳米抗体。该重组双特异性纳米抗体的相对分子质量大小为28.6kDa，浓度为0.8mgmL，纯度大于90％，产量高达3.5mgL，生物学活性高。
主权项：1.靶向新城疫病毒和H9亚型禽流感病毒的重组双特异性纳米抗体，其特征在于，从免疫羊驼的VHH噬菌体文库中筛选出两条分别针对新城疫病毒和H9亚型禽流感病毒的重链抗体可变区序列NDV-Nb043和H9-Nb055，通过柔性连接肽连接这两条重链抗体可变区序列NDV-Nb043和H9-Nb055获得连接产物NDV-Nb043+H9-Nb055，并将其定向克隆至载体pPIC9K构建重组质粒pPIC9K-NDV-Nb043+H9-Nb055，再转化至毕赤酵母X-33感受态细胞中筛选用于表达重组双特异性纳米抗体的工程菌株，并对工程菌株进行甲醇诱导，收集上清并纯化后，获得能同时靶向新城疫病毒和H9亚型禽流感病毒的重组双特异性纳米抗体；所述连接产物NDV-Nb043+H9-Nb055的核苷酸序列如SEQIDNO:5所示，编码的氨基酸序列如SEQIDNO:6所示；所述重组质粒pPIC9K-NDV-Nb043+H9-Nb055的核苷酸序列如SEQIDNO:7所示。
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