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申请/专利权人:杭州优泽生物科技有限公司
摘要:本发明提供了一种巯基转移酶‑PLP共固定化酶及其制备方法与应用。本发明提供的巯基转移酶‑PLP共固定化酶其酶活回收80%,将其应用于生物催化O‑琥珀酰‑L‑高丝氨酸制备L‑蛋氨酸中,在底物浓度达120gL条件下反应1.5h,底物转化率在85%以上。本发明催化L‑蛋氨酸合成时无需额外辅酶添加,产品产率与纯度高,并且可简化工艺步骤,减少“三废”排放,能够降低生产成本的20%,且具备大规模应用的潜力,在L‑蛋氨酸的工业化生产中具有极高应用价值。
主权项:1.一种巯基转移酶-PLP共固定化酶的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:步骤一:将巯基转移酶编码基因转化到宿主菌大肠杆菌中,得到基因工程菌经发酵培养,获得湿菌体悬浮于缓冲液中得到菌悬液,菌悬液经细胞破碎、离心,制得巯基转移酶粗酶液;步骤二:巯基转移酶粗酶液与辅酶5'-磷酸吡哆醛混合形成复合酶液,20~25℃下孵育2~6h后再加入活化后的树脂固定化5~15h,抽滤,用缓冲液清洗,抽滤去除缓冲液,制得巯基转移酶-PLP共固定化酶;其中,所述树脂选自环氧树脂或氨基树脂。
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权利要求:
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