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申请/专利权人：上海应用技术大学

摘要：本发明公开了一种香气物质协同作用的分析方法，包括如下步骤：1配制恒定浓度的OR52D1嗅觉受体蛋白与单个香气物质、两种香气物质混合物；2将样品混合物放置到微量热泳动装置进行测量；3分别测量单个香气物质、两种香气物质和嗅觉受体的荧光，并且将得到的归一化荧光相对于时间作图，拟合MST轨迹线，再根据MST轨迹线的Kd值研究在添加其他香气物质后，嗅觉受体和香气物质的亲和力变化，从而分析出两种香气物质之间的协同作用。与现有技术相比，本发明的方法灵敏度高，操作简便，检测快速高效，样品消耗少量，弥补了香气物质协同作用的客观验证不足的问题。

主权项：1.一种香气物质协同作用的分析方法，其特征在于，运用微量热泳动技术，从配体亲和力的角度测定并分析所述香气物质之间的相互作用，包括如下步骤：1配制检测溶液：①OR52D1嗅觉受体蛋白受试储备液的制备：将蛋白粉末离心并用ddH2O溶解至冻干前体积，再用缓冲溶液调整受体储备液浓度，将经荧光染料标记过的OR52D1嗅觉受体蛋白用缓冲溶液溶解，作为初始浓度的受体蛋白受试储备液；②所述香气物质受试储备液的制备：取香气物质标准品用所述缓冲溶液溶解定容，作为初始浓度的香气物质受试储备液；③微量热泳动仪测试液的制备：使用所述OR52D1嗅觉受体蛋白受试储备液以及所述香气物质受试储备液分别配置梯度浓度的单一配体与恒定浓度的受体蛋白的测试样品，以及梯度浓度的第一配体与恒定浓度的受体蛋白、第二配体的测试样品；2微量热泳动仪参数设置：使用微量热泳动仪对①中的OR52D1嗅觉受体蛋白受试液进行预测试，根据预测试结果设定测量参数；3香气物质与OR52D1嗅觉受体蛋白亲和力的测定：根据步骤2的测定参数，按所述香气物质的实际浓度设置配体初始浓度，接着设定测定的梯度，吸取步骤1③中的测试样品，将所述测试样品置于所述微量热泳动仪内测定所述香气物质与所述OR52D1嗅觉受体蛋白的相互作用；4数据处理与结果分析：使用微量热泳动仪的内置软件NTAnalysisSoftware计算得到解离常数Kd值进行数据处理并分析，得到所述香气物质与所述OR52D1嗅觉受体蛋白的结合能力以及热力学参数。

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百度查询： 上海应用技术大学 一种香气物质协同作用的分析方法