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申请/专利权人：石河子大学
摘要：本发明公开了一种鸡肠道基石菌的分离方法与应用，涉及微生态制剂技术领域。包括以下步骤：a、联合抗生素法干预鸡的饮水；b、样本采集；c、16srRNA基因测序分析；d、菌株的分离纯化；e、菌株形态鉴定；f、菌株的分子鉴定。本发明采用上述的一种鸡肠道基石菌的分离方法与应用，筛选方法简便易行，可用于肠道基石菌的筛选，筛选得到的基石菌，耐受性、抑菌性、抗生素敏感性优异，为益生菌微生态制剂的开发奠定基础。
主权项：1.一种鸡肠道基石菌的分离方法，其特征在于，包括以下步骤：a、联合抗生素法干预鸡的饮水：选用75日龄的健康黄羽肉鸡120只，随机分为2组，空白对照组、饮水干预组，每组设6个重复，每个重复10只鸡，试验期为7d，7d后所有的鸡统一饲喂基础日粮和清洁饮水进行恢复和观察，恢复期为7d，累计14d；b、样本采集：采集鸡的空肠、回肠和盲肠组织粘膜，然后快速投入液氮中冷冻，转移至实验室-80℃下保存；c、16srRNA基因测序分析：对步骤b中采集到的空肠、回肠和盲肠肠道黏膜进行16srRNA测序，检测饲喂抗生素恢复前后的基石菌存留情况；d、菌株的分离纯化：选取回肠、盲肠粘膜样品，PBS磷酸缓冲盐溶液稀释至10-5、10-6、10-7，在MRS培养基上进行涂布，然后在37℃培养箱中进行培养，培养条件为200rpm，24h，挑取单菌落分离纯化三代；e、菌株形态鉴定：对菌落形态和细菌形态进行鉴定；f、菌株的分子鉴定：使用细菌DNA提取试剂盒提取分离菌株的基因组DNA，并将其作为PCR反应模板，进行PCR反应，上游引物为27F，下游引物为1492R，将PCR扩增产物进行测序，测序结果在NCBI的BLAST软件进行基因序列比对并构建系统发育树。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 石河子大学 一种鸡肠道基石菌的分离方法与应用
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