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摘要:本发明公开了双向聚合‑转录扩增编码的双色荧光生物传感器用于无标记和无引物检测多种piRNA,属于生物分析技术领域。我们开发一种双向聚合‑转录扩增编码的双色荧光生物传感器用于无标记、无引物检测多种piRNA。所设计的发夹探针包含一个回文尾部,可以作为目标识别单元、聚合引物和转录模板。当靶标存在时,发夹探针将被打开,暴露出回文序列,在聚合酶辅助下,引发双向聚合和转录反应,产生RNA适配体。适配体随后与相应的荧光团结合,形成RNA适配体‑荧光团复合物,以产生增强的荧光信号。该生物传感器能够灵敏地定量piRNA,piR‑36026的检测限为82.08aM,piR‑36743的检测限为44.44aM。
主权项:1.一种双向聚合-转录扩增编码的用于无标记和无引物检测多种piRNA的双色荧光生物传感器,其特征在于,所述传感器包括:发夹探针1HP1、发夹探针2HP2、KF聚合酶、T7RNA聚合酶、DFHBI-1T、MG;将发夹探针1HP1和或发夹探针2HP2和样品溶液、KF聚合酶混合孵育后,添加T7RNA聚合酶、DFHBI-1T、MG进行孵育后,检测样品中的piRNA-36026和或piRNA-36743;所述发夹探针1HP1序列为:GTGTGGGAGCCCACACTCTACTCGACAGATACGAATATCTGGACCCGACCGTCTCCCACACGACTAATACGACTCACTATAGGGATTACACCATGGGGCCTAATTAGTCGACTA;所述发夹探针2HP2序列为:GGGGATCCATTCGTTACCTGGCTCTCGCCAGTCGGGATCCCCCGGCTAATACGACTCACTATAGGGACTACACTACGGAAACATTAGCCGGCTA。
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