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申请/专利权人：新疆第二医学院

摘要：本发明公开了一种从黑果小檗果实中分离纯化锦葵素‑3‑O‑葡萄糖苷的方法，属于天然产物的分离纯化技术领域。本发明首先从黑果小檗果实中提取花色苷粗提物，然后将花色苷粗提物通过大孔树脂以及聚酰胺树脂，洗脱、浓缩，进行纯化，最后经过SephadexLH‑20凝胶柱分离，得到锦葵素‑3‑O‑葡萄糖苷样品。本发明的纯化、分离工艺简单，能有效分离得到高纯度花色苷单体，为大规模的工业化生产打下基础。

主权项：1.一种从黑果小檗果实中分离纯化锦葵素-3-O-葡萄糖苷的方法，其特征在于，包括以下步骤：1将黑果小檗粉末和乙醇酸性溶液混合后超声提取，提取液经萃取后得到花色苷粗提物；2采用大孔吸附树脂对所述花色苷粗提物进行分离纯化，得到样品1；3采用聚酰胺树脂对所述样品1进行分离纯化，得到样品2；4将所述样品2采用SephadexLH-20凝胶柱分离纯化，得到所述锦葵素-3-O-葡萄糖苷；步骤1中，所述黑果小檗粉末的粒径为20～50目；所述黑果小檗粉末和乙醇酸性溶液的质量体积比为1g∶25mL；所述超声提取的次数为3～4次，每次提取的时间为20min；所述乙醇酸性溶液为乙醇、盐酸和水的混合溶液，混合溶液中乙醇的浓度为70vol.％、盐酸的浓度为0.8vol.％；步骤1中，所述萃取具体包括：将提取液浓缩至原体积0.1～0.2倍，得到提取浓缩液，然后将提取浓缩液与乙酸乙酯以体积比为1∶1～4的比例混合，静置4h进行萃取，萃取3～4次，收集合并水相，减压浓缩至浸膏状，得到所述花色苷粗提物；步骤2具体为：将花色苷粗提物溶解后以2～5mLmin的速度注入大孔吸附树脂柱中，直至吸附体积达到树脂总体积的13，依次用10倍柱体积的酸性水溶液、3倍柱体积的10vol.％乙醇酸性溶液、5倍柱体积的30vol.％乙醇酸性溶液以2mLmin的速度洗脱，收集30vol.％乙醇酸性溶液的洗脱液，减压浓缩至浸膏状，得到样品1；所述大孔吸附树脂柱包括AB-8或者XDA-7A大孔吸附树脂柱；所述酸性水溶液为盐酸和水的混合溶液，混合溶液中盐酸的浓度为0.5vol.％；所述10vol.％乙醇酸性溶液为乙醇、盐酸和水的混合溶液，混合溶液中乙醇的浓度为10vol.％、盐酸的浓度为0.5vol.％；所述30vol.％乙醇酸性溶液为乙醇、盐酸和水的混合溶液，混合溶液中乙醇的浓度为30vol.％、盐酸的浓度为0.5vol.％；步骤3具体为：将样品1溶解后以2～5mLmin的速度注入聚酰胺树脂柱中，直至吸附体积达到树脂总体积的13，先用酸性水溶液以2～5mLmin的速度洗脱至洗出液无色，再利用3倍柱体积30～50vol.％乙醇酸性溶液以2mLmin的速度洗脱，收集30～50vol.％乙醇酸性溶液的洗脱液，冷冻干燥，得到样品2；所述聚酰胺树脂柱中的聚酰胺树脂的粒径为60～120目；所述酸性水溶液为盐酸和水的混合溶液，混合溶液中盐酸的浓度为0.5vol.％；所述30～50vol.％乙醇酸性溶液为乙醇、盐酸和水的混合溶液，混合溶液中乙醇的浓度为30～50vol.％、盐酸的浓度为0.5vol.％；步骤4具体为：将样品2用甲醇溶解后过膜，上样于SephadexLH-20凝胶柱，用20～40vol.％甲醇酸性溶液以1～2mLmin的速度洗脱，在洗脱过程中每管5mL收集，用紫外-可见光分光光度计监测洗脱过程，收集第一个主峰所对应的流份，浓缩，冷冻干燥，得到锦葵素-3-O-葡萄糖苷；所述20～40vol.％甲醇酸性溶液为甲醇、盐酸和水的混合溶液，混合溶液中甲醇的浓度为20～40vol.％、盐酸的浓度为0.5vol.％；所述SephadexLH-20凝胶柱的规格为：2.5cm×80cm，上样量为0.2～0.4g。

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