买专利卖专利找龙图腾，真高效！ 查专利查商标用IPTOP,全免费！专利年费监控用IP管家,真方便！

申请/专利权人：吉林农业大学

摘要：本发明公开了一种稳态化锦葵素衍生物及其制备方法与应用，采用非热的高压脉冲电场技术提取纯化并制备山葡萄中锦葵素，可以最大程度保护花青素不受破坏。将锦葵素与咖啡酸进行超高压稳态化处理，可以获得一种锦葵素衍生物[锦葵‑3‑O‑愈创木酚Malvidin‑3‑O‑guiacol，Mv3C]制备技术，其结构较比未稳态化处理的锦葵素稳定，有更好的光热稳定性，还具有很好的抗氧化应激作用与调节肠道作用。

主权项：1.一种稳态化锦葵素衍生物，其特征在于，所述稳态化锦葵素衍生物的结构式为： 。

全文数据：一种稳态化锦葵素衍生物及其制备方法与应用技术领域本发明涉及花青素提取技术领域，更具体的说是涉及一种稳态化锦葵素衍生物及其制备方法与应用。背景技术目前，天然花青素色泽艳丽，具有很好的抗氧化作用，可保护肝脏和眼睛，增强血管弹性等，在食品加工等领域应用潜力大。花青素广泛存在于植物中，在山葡萄VitisamurensisRupr、蓝莓和蓝靛果中含量尤为丰富，山葡萄在我国长白山地区种植历史已有50余年，花青素平均含量在150mg100g.FW以上，个别品种高达400mg100g.FW，可作为天然花青素的良好来源，且其中锦葵类花青素含量最高，约占总花青素的50～60％。但是，天然花青素稳定性差，易受温度、光照、pH、氧、酶、金属离子等因素影响，在提取、加工及贮藏过程中易发生降解，出现褪色、变色、沉淀等现象，使其应用受限，而锦葵素为锦葵类花青素的一种最小单元，稳定性最差，不利于加工、保存及应用，因此需要提高其稳定性。花青素可与有机酸、蛋白、酚类等物质产生自发性辅色来提高色泽稳定性，但自发性辅色反应速度慢，效率低，无法满足生产需要。因此，一种稳态化锦葵素衍生物及其制备方法与应用是本领域技术人员亟需解决的问题。发明内容有鉴于此，本发明提供了一种稳态化锦葵素衍生物及其制备方法与应用，采用非热的高压脉冲电场技术提取纯化并制备山葡萄中锦葵素，可以最大程度保护花青素不受破坏。将锦葵素与咖啡酸进行超高压稳态化处理，可以获得一种锦葵素衍生物[锦葵-3-O-愈创木酚Malvidin-3-O-guiacol，Mv3C]制备技术，其结构较比未稳态化处理的锦葵素稳定，有更好的光热稳定性，还具有很好的抗氧化应激作用与调节肠道作用。为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：一种稳态化锦葵素衍生物，所述稳态化锦葵素衍生物的结构式为：上述优选技术方案的有益效果是：本发明公开的稳态化锦葵素衍生物[锦葵-3-O-愈创木酚Malvidin-3-O-guiacol，Mv3C]，其结构较比未稳态化处理的锦葵素稳定，有更好的光热稳定性，还具有很好的抗氧化应激作用与调节肠道作用，从而可以得到更好的应用和推广。本发明还提供了一种如上所述的稳态化锦葵素衍生物的制备方法，具体包括如下步骤：1提取纯化山葡萄锦葵素：采用高压脉冲电场技术提取山葡萄中的花青素，再经过分离、纯化、制备得到山葡萄锦葵素；2超高压稳态化处理：将上述制备得到的山葡萄锦葵素与咖啡酸进行超高压稳态化处理，得到稳态化锦葵素衍生物。上述优选技术方案的有益效果是：本发明公开的制备方法中先采用非热的高压脉冲电场技术提取、纯化、制备得到山葡萄中锦葵素，可以最大程度保护花青素不受破坏；然后将锦葵素与咖啡酸进行超高压稳态化处理，可以获得锦葵素衍生物锦葵-3-O-愈创木酚。优选的，所述步骤1具体包括：A、将山葡萄破碎后在高压脉冲电场中提取，然后经过分离、浓缩得到浓缩液；B、利用大孔树脂柱对上述浓缩液进行洗脱，得到的洗脱液经过浓缩得到山葡萄花青素膏体；C、将山葡萄花青素膏体稀释后利用制备型高效液相色谱进行分离，收集得到锦葵类花青素洗脱液，再经过冷冻干燥即可得到山葡萄锦葵类花青素提取物；D、将山葡萄锦葵类花青素提取物依次经过溶解、水解、过滤得到滤液，滤液采用大孔树脂柱纯化后，再经过减压浓缩、冷冻干燥即可得到山葡萄锦葵素。上述优选技术方案的有益效果是：本发明先将山葡萄破碎，然后在高压脉冲电场中进行提取可以加快花青素的提取速率；再利用大孔树脂住进行洗脱能够初步的提纯得到山葡萄花青素膏体；再利用制备型高效液相色谱可以从山葡萄花青素膏体分离得到山葡萄锦葵类花青素提取物；再将山葡萄锦葵类花青素提取物水解得到山葡萄锦葵素粗提取物；最后将山葡萄锦葵素粗提取物再经过大孔树脂柱纯化，再依次经过浓缩、干燥即可得到山葡萄锦葵素，其纯度＞95％。优选的，所述步骤A具体为：将山葡萄去果柄后加入胶体磨中，以2000～4000rmin转速研磨10～20min得到山葡萄研磨浆；然后将山葡萄研磨浆按照与提取液质量比为1:5～9加入至盐酸、乙醇和去离子水混合得到的提取液中，所述提取液浓度为0.1～0.5％盐酸—55～75％乙醇vv，即100mL溶液中含有0.1～0.5mL的HCl和55～75mL的乙醇，其余为去离子水，并置于高压脉冲电场中进行提取，所述高压脉冲电场的电场强度为10～20kVcm、脉冲个数为4～10；接着以3000～5000rmin转速离心5～15min后分离得到上清液；最后上清液在40～55℃、40～60rmin、真空度0.08～0.1Mpa条件下减压浓缩至密度为1.0～1.1×103kgm3的浓缩液。优选的，所述步骤B具体为：在4～10℃条件下，将浓缩液用去离子水稀释5～10倍，以1～2BVh的上样速率上样至D101大孔树脂柱中，然后静置15～35min；接着以1～2BVh洗脱速率先用4～6倍柱体积去离子水洗脱、再用4～6倍柱体积盐酸、乙醇和去离子水的混合溶液洗脱至无色，合并洗脱液；将洗脱液在45～55℃、40～60rmin、真空度0.08～0.1Mpa条件下减压浓缩至密度为1.0～1.1×103kgm3，得山葡萄花青素膏体；所述盐酸、乙醇和去离子水的混合溶液中盐酸的体积浓度为0.1％，乙醇的体积浓度为75％。优选的，所述步骤C具体为：用体积浓度为0.5～1％的盐酸甲醇溶液将山葡萄花青素膏体稀释10～20倍；然后采用制备型高效液相色谱进行分离，进样量为2mL，流动相以2mLmin流速进行洗脱，流动相由A相为5％vv甲酸水溶液和B相甲醇，按照下述洗脱时间和洗脱梯度对应关系进行分离制备：0～5min流动相中B相体积分数由8％递增至10％、5～50min流动相中B相体积分数为10％、50～55min流动相中B相体积分数由10％递增至15％、55～60min流动相中B相体积分数由15％递增至20％、60～80min流动相中B相体积分数由20％递增至25％、80～100min流动相中B相体积分数由25％递增至35％、100～105min流动相中B相体积分数由35％递增至70％；在78～80min和90～92min时收集锦葵类花青素洗脱液，再在冷阱温度-40℃、真空度50～100Pa条件冷冻干燥8～10h，即可得到山葡萄锦葵类花青素提取物。优选的，所述高效液相色谱分离过程中采用Waters2545制备型高效液相色谱、Waters2489UVVis检测器、SunFirePrepC18柱，所述SunFirePrepC18柱尺寸为10mm×250mm，5μm，SunFirePrepC18柱的柱温为25℃；检测波长为530nm。优选的，所述步骤D具体为：将1～5g山葡萄锦葵类花青素提取物用体积浓度为5～10％的盐酸甲醇溶液溶解定容至25～50mL，并于沸水浴中水解1～2h，再使用冷水浴冷却，接着在45～55℃、40～60rmin、真空度0.08～0.1Mpa条件下减压浓缩至密度为1.0～1.1×103kgm3，再通过有机滤膜过滤得到滤液；将滤液稀释10～20倍后，在4～10℃条件下，将浓缩液用去离子水稀释5～10倍，以1～2BVh的上样速率上样至D101大孔树脂柱中，然后静置15～35min；接着以1～2BVh洗脱速率先用4～6倍柱体积去离子水洗脱、再用4～6倍柱体积的盐酸、乙醇和去离子水的混合溶液洗脱至无色，合并洗脱液；将洗脱液在45～55℃、40～60rmin、真空度0.08～0.1Mpa条件下减压浓缩至密度为1.0～1.1×103kgm3，再经过冷阱温度-40℃，真空度50～100Pa条件冷冻干燥8～10h，得到山葡萄锦葵素；所述盐酸、乙醇和去离子水的混合溶液中盐酸的体积浓度为0.1％，乙醇的体积浓度为75％。优选的，所述步骤2具体包括：A先取3～8倍咖啡酸质量的无水乙醇溶解咖啡酸，然后加入上述得到的山葡萄锦葵素，再用pH为3.0的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液稀释至山葡萄锦葵素的浓度为0.1mgmL，即可得到反应液备用；所述锦葵素与咖啡酸的浓度比1:3～5；B将反应液先在避光、50～60℃水浴条件下混合30～60min；然后在200～400MPa压力条件下进行1～15min的超高压稳态化处理；C处理液以3000～5000rmin转速离心5～10min后分离得到上清液；再将上清液在4～10℃条件下，以1～2BVh的上样速率上样至D101大孔树脂柱中，然后静置15～35min；接着以1～2BVh洗脱速率先用4～6倍柱体积去离子水洗脱、再用4～6倍柱体积的盐酸、乙醇和去离子水的混合溶液洗脱至无色，合并洗脱液；将洗脱液在45～55℃、40～60rmin、真空度0.08～0.1Mpa条件下减压浓缩至密度为1.0～1.1×103kgm3，再经过冷阱温度-40℃，真空度50～100Pa条件冷冻干燥8～10h，得到稳态化锦葵素衍生物；所述盐酸、乙醇和去离子水的混合溶液中盐酸的体积浓度为0.1％，乙醇的体积浓度为75％。上述优选技术方案的有益效果是：本发明利用超高压技术促进促锦葵素与咖啡酸进行稳态化处理，加快反应效率，并且提高稳态化处理效果，提高稳态化锦葵素衍生物的稳定性。本发明还提供了一种稳态化锦葵素衍生物在抗氧化应激方面的应用，所述稳态化锦葵素衍生物采用上述方法制备得到。本发明还提供了一种稳态化锦葵素衍生物在调节肠道方面的应用，所述稳态化锦葵素衍生物采用上述方法制备得到。经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明公开提供了一种稳态化锦葵素衍生物及其制备方法与应用，具有如下有益效果：1采用非热的高压脉冲电场技术提取纯化并制备山葡萄中锦葵素，可以最大程度保护花青素不受破坏，提高提取效率；2将锦葵素与咖啡酸进行超高压稳态化处理，可以加快稳态化处理效率，并且提高获得的稳态化锦葵素衍生物的稳定性；3制备得到的稳态化锦葵素衍生物[锦葵-3-O-愈创木酚Malvidin-3-O-guiacol，Mv3C]具有优异的光热稳定性，还具有很好的抗氧化应激作用与调节肠道作用，从而可以进一步的进行推广和应用。附图说明为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。图1附图为本发明提供的山葡萄锦葵素的高效液相色谱图；图2附图为本发明提供的稳态化锦葵素衍生物的高效液相色谱图；图3附图为本发明提供的稳态化锦葵素衍生物的MSMS图谱和化合物结构；图4附图为本发明提供的超高压稳态化处理促进稳态化锦葵素衍生物形成的机理；图5附图为本发明提供的小鼠肝脏组织切片的光学显微镜照片40×、200×、400×；图6附图为本发明提供的小鼠心脏组织切片的光学显微镜照片40×、200×、400×；图7附图为本发明提供的小鼠肾脏组织切片的光学显微镜照片40×、200×、400×；图8附图为本发明提供的小鼠肠道菌群样品稀释性曲线；图9附图为本发明提供的小鼠肠道菌群样品香农指数曲线；图10附图为本发明提供的小鼠肠道菌群主成分分析图；图11附图为本发明提供的小鼠肠道菌群各组样本在门水平的结构图；图12附图为本发明提供的小鼠肠道菌群4组样本A和24个样本B在属水平的结构图。在图中：CK为空白对照组，M为模型组，A为山葡萄锦葵素组，U为稳态化锦葵素衍生物组。具体实施方式下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。本发明实施例公开了一种稳态化锦葵素衍生物，稳态化锦葵素衍生物的结构式为：本发明还提供了一种如上所述的稳态化锦葵素衍生物的制备方法，具体包括如下步骤：1提取纯化山葡萄锦葵素A、将山葡萄去果柄后加入胶体磨中，以2000～4000rmin转速研磨10～20min得到山葡萄研磨浆；然后将山葡萄研磨浆按照与提取液质量比为1:5～9加入至盐酸、乙醇和去离子水混合得到的提取液中，所述提取液浓度为0.1～0.5％盐酸—55～75％乙醇vv，即100mL溶液中含有0.1～0.5mL的HCl和55～75mL的乙醇，其余为去离子水，并置于高压脉冲电场中进行提取，所述高压脉冲电场的电场强度为10～20kVcm、脉冲个数为4～10；接着以3000～5000rmin转速离心5～15min后分离得到上清液；最后上清液在40～55℃、40～60rmin、真空度0.08～0.1Mpa条件下减压浓缩至密度为1.0～1.1×103kgm3的浓缩液；B、在4～10℃条件下，将浓缩液用去离子水稀释5～10倍，以1～2BVh的上样速率上样至D101大孔树脂柱中，然后静置15～35min；接着以1～2BVh洗脱速率先用4～6倍柱体积去离子水洗脱、再用4～6倍柱体积的盐酸、乙醇和去离子水的混合溶液洗脱至无色，合并洗脱液；将洗脱液在45～55℃、40～60rmin、真空度0.08～0.1Mpa条件下减压浓缩至密度为1.0～1.1×103kgm3，得山葡萄花青素膏体；所述盐酸、乙醇和去离子水的混合溶液中盐酸的体积浓度为0.1％，乙醇的体积浓度为75％；C、用浓度为0.5～1％vv的盐酸甲醇溶液将山葡萄花青素膏体稀释10～20倍；然后采用制备型高效液相色谱进行分离，进样量为2mL，流动相以2mLmin流速进行洗脱，流动相由A相为5％vv甲酸水溶液和B相甲醇，按照下述洗脱时间和洗脱梯度对应关系进行分离制备：0～5min流动相中B相体积分数由8％递增至10％、5～50min流动相中B相体积分数为10％、50～55min流动相中B相体积分数由10％递增至15％、55～60min流动相中B相体积分数由15％递增至20％、60～80min流动相中B相体积分数由20％递增至25％、80～100min流动相中B相体积分数由25％递增至35％、100～105min流动相中B相体积分数由35％递增至70％；在78～80min和90～92min时收集锦葵类花青素洗脱液，再在冷阱温度-40℃、真空度50～100Pa条件冷冻干燥8～10h，即可得到山葡萄锦葵类花青素提取物；高效液相色谱分离过程中采用Waters2545制备型高效液相色谱、Waters2489UVVis检测器、SunFirePrepC18柱，所述SunFirePrepC18柱尺寸为10mm×250mm，5μm，SunFirePrepC18柱的柱温为25℃；检测波长为530nm；D、将1～5g山葡萄锦葵类花青素提取物用体积浓度为5～10％的盐酸甲醇溶液溶解定容至25～50mL，并于沸水浴中水解1～2h，再使用冷水浴冷却，接着在45～55℃、40～60rmin、真空度0.08～0.1Mpa条件下减压浓缩至密度为1.0～1.1×103kgm3，再通过有机滤膜过滤得到滤液；将滤液稀释10～20倍后，在4～10℃条件下，将浓缩液用去离子水稀释5～10倍，以1～2BVh的上样速率上样至D101大孔树脂柱中，然后静置15～35min；接着以1～2BVh洗脱速率先用4～6倍柱体积去离子水洗脱、再用4～6倍柱体积的盐酸、乙醇和去离子水的混合溶液洗脱至无色，合并洗脱液；将洗脱液在45～55℃、40～60rmin、真空度0.08～0.1Mpa条件下减压浓缩至密度为1.0～1.1×103kgm3，再在冷阱温度-40℃、真空度50～100Pa条件冷冻干燥8～10h，得到山葡萄锦葵素；所述盐酸、乙醇和去离子水的混合溶液中盐酸的体积浓度为0.1％，乙醇的体积浓度为75％。2超高压稳态化处理A先取3～8倍咖啡酸质量的无水乙醇溶解咖啡酸，然后加入上述得到的山葡萄锦葵素，再用pH为3.0的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液稀释至山葡萄锦葵素的浓度为0.1mgmL，即可得到反应液备用；所述锦葵素与咖啡酸的浓度比1:3～5；B将反应液先在避光、50～60℃水浴条件下混合30～60min；然后在200～400MPa压力条件下进行1～15min的超高压稳态化处理，得到处理液；C处理液以3000～5000rmin转速离心5～10min后分离得到上清液；再将上清液在4～10℃条件下，以1～2BVh的上样速率上样至D101大孔树脂柱中，然后静置15～35min；接着以1～2BVh洗脱速率先用4～6倍柱体积去离子水洗脱、再用4～6倍柱体积的盐酸、乙醇和去离子水的混合溶液洗脱至无色，合并洗脱液；将洗脱液在45～55℃、40～60rmin、真空度0.08～0.1Mpa条件下减压浓缩至密度为1.0～1.1×103kgm3，再经过冷阱温度-40℃，真空度50～100Pa条件冷冻干燥8～10h，得到稳态化锦葵素衍生物；所述盐酸、乙醇和去离子水的混合溶液中盐酸的体积浓度为0.1％，乙醇的体积浓度为75％。实施例1本发明还提供了一种如上所述的稳态化锦葵素衍生物的制备方法，具体包括如下步骤：1提取纯化山葡萄锦葵素A、将山葡萄去果柄后加入胶体磨中，以4000rmin转速研磨20min得到山葡萄研磨浆；然后将山葡萄研磨浆按照与提取液质量比为1:9加入至盐酸、乙醇和去离子水混合得到的提取液中，提取液浓度为0.5％盐酸—75％乙醇vv，即100mL溶液中含有0.5mL的HCl和75mL的乙醇，其余为去离子水，并置于高压脉冲电场中进行提取，所述高压脉冲电场的电场强度为20kVcm、脉冲个数为10；接着以5000rmin转速离心5min后分离得到上清液；最后上清液在55℃、60rmin、真空度0.1Mpa条件下减压浓缩至密度为1.1×103kgm3的浓缩液B、在10℃条件下，将浓缩液用去离子水稀释10倍，以2BVh的上样速率上样至D101大孔树脂柱中，然后静置35min；接着以2BVh洗脱速率先用6倍柱体积去离子水洗脱、再用6倍柱体积的0.1％HCl—75％乙醇vv，即100mL溶液中含有0.1mL的HCl和75mL的乙醇，其余为去离子水洗脱至无色，合并洗脱液；将洗脱液在55℃、60rmin、真空度0.1Mpa条件下减压浓缩至密度为1.1×103kgm3，得山葡萄花青素膏体；C、用体积浓度为1％的盐酸甲醇溶液将山葡萄花青素膏体稀释10倍；然后进行高效液相色谱分离，进样量为2mL，流动相以2mLmin流速进行洗脱，流动相由A相为5％vv甲酸水溶液和B相为甲醇按照浓度梯度组成，然后将流动相以2mLmin流速进行洗脱，洗脱时间和浓度梯度对应关系为：0～5min流动相中B相体积分数由8％递增至10％、5～50min流动相中B相体积分数为10％、50～55min流动相中B相体积分数由10％递增至15％、55～60min流动相中B相体积分数由15％递增至20％、60～80min流动相中B相体积分数由20％递增至25％、80～100min流动相中B相体积分数由25％递增至35％、100～105min流动相中B相体积分数由35％递增至70％；在78～80min和90～92min时收集锦葵类花青素洗脱液，再经过冷阱温度-40℃、真空度100Pa条件冷冻干燥10h，即可得到山葡萄锦葵素粗提取物；高效液相色谱分离过程中采用Waters2545制备型高效液相色谱、Waters2489UVVis检测器、SunFirePrepC18柱，所述SunFirePrepC18柱尺寸为10mm×250mm，5μm，SunFirePrepC18柱的柱温为25℃；检测波长为530nm；D、将5g山葡萄锦葵素粗提取物用体积浓度为5％的盐酸甲醇溶液溶解定容至50mL，并于沸水浴中水解2h，冷却通过有机滤膜过滤得到滤液；将滤液稀释20倍后，在10℃条件下，以2BVh的上样速率上样至D101大孔树脂柱中，然后静置35min；接着以2BVh洗脱速率先用6倍柱体积去离子水洗脱、再用6倍柱体积的0.1％HCl—75％乙醇vv，即100mL溶液中含有0.1mL的HCl和75mL的乙醇，其余为去离子水洗脱至无色，合并洗脱液；将洗脱液在55℃、60rmin、真空度0.1Mpa条件下减压浓缩至密度为1.1×103kgm3，再经过冷阱温度-40℃、真空度50Pa条件冷冻干燥10h，得到山葡萄锦葵素。2超高压稳态化处理A先取8倍咖啡酸质量的无水乙醇溶解咖啡酸，然后加入上述得到的山葡萄锦葵素，再用pH为3.0的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液稀释至山葡萄锦葵素的浓度为0.1mgmL，即可得到反应液备用；所述锦葵素与咖啡酸的浓度比1:5；B将反应液先在避光、60℃水浴条件下混合60min；然后在400MPa压力条件下进行1min的超高压稳态化处理，得到处理液；C处理液以5000rmin转速离心5min后分离得到上清液；再将上清液在10℃条件下，以2BVh的上样速率上样至D101大孔树脂柱中，然后静置35min；接着以2BVh洗脱速率先用6倍柱体积去离子水洗脱、再用0.1％HCl—75％乙醇vv，即100mL溶液中含有0.1mL的HCl和75mL的乙醇，其余为去离子水洗脱6倍柱体积至无色，合并洗脱液；将洗脱液在55℃，60rmin，真空度0.1Mpa条件下减压浓缩至密度为1.1×103kgm3，再在冷阱温度-40℃、真空度50Pa条件冷冻干燥10h，得到稳态化锦葵素衍生物。实施例2本发明实施例2公开了一种稳态化锦葵素衍生物的制备方法，具体包括如下步骤：1提取纯化山葡萄锦葵素A、将山葡萄去果柄后加入胶体磨中，以3500rmin转速研磨15min得到山葡萄研磨浆；然后将山葡萄研磨浆按照与提取液质量比为1：7加入至盐酸、乙醇和去离子水混合得到的提取液中，所述提取液浓度为0.25％盐酸—65％乙醇vv，即100mL溶液中含有0.25mL的HCl和65mL的乙醇，其余为去离子水，并置于高压脉冲电场中进行提取，所述高压脉冲电场的电场强度为15kVcm、脉冲个数为5；接着以4000rmin转速离心10min后分离得到上清液；最后上清液在55℃、50rmin、真空度0.09Mpa条件下减压浓缩至密度为1.05×103kgm3的浓缩液；B、在8℃条件下，将浓缩液用去离子水稀释7.5倍，以1.5BVh的上样速率上样至D101大孔树脂柱中，然后静置25min；接着以1.5BVh洗脱速率先用5倍柱体积去离子水洗脱、再用5倍柱体积的0.1％HCl—75％乙醇vv，即100mL溶液中含有0.1mL的HCl和75mL的乙醇，其余为去离子水洗脱至无色，合并洗脱液；将洗脱液在50℃、50rmin、真空度0.09Mpa条件下减压浓缩至密度为1.05×103kgm3，得山葡萄花青素膏体；C、用体积浓度为0.75％的盐酸甲醇溶液将山葡萄花青素膏体稀释18倍；然后采用制备型高效液相色谱进行分离，进样量为2mL，流动相以2mLmin流速进行洗脱，流动相由A相为5％vv甲酸水溶液和B相为甲醇按照浓度梯度组成，洗脱时间和浓度梯度对应关系为：0～5min流动相中B相体积分数由8％递增至10％、5～50min流动相中B相体积分数为10％、50～55min流动相中B相体积分数由10％递增至15％、55～60min流动相中B相体积分数由15％递增至20％、60～80min流动相中B相体积分数由20％递增至25％、80～100min流动相中B相体积分数由25％递增至35％、100～105min流动相中B相体积分数由35％递增至70％；在78～80min和90～92min时收集锦葵类花青素洗脱液，再经过过冷阱温度-40℃、真空度75Pa条件冷冻干燥9h，即可得到山葡萄锦葵类花青素提取物；高效液相色谱分离过程中采用Waters2545制备型高效液相色谱、Waters2489UVVis检测器、SunFirePrepC18柱，所述SunFirePrepC18柱尺寸为10mm×250mm，5μm，SunFirePrepC18柱的柱温为25℃；检测波长为530nm；D、将2.5g山葡萄锦葵素粗提取物用体积浓度为7.5％的盐酸甲醇溶液溶解定容至50mL，并于沸水浴中水解1.5h，冷水浴冷却，在50℃、50rmin、真空度0.09Mpa条件下减压浓缩至密度为1.05×103kgm3，再通过有机滤膜过滤得到滤液；将滤液稀释15倍后，在8℃条件下，以1.5BVh的上样速率上样至D101大孔树脂柱中，然后静置25min；接着以1.5BVh洗脱速率先用5倍柱体积去离子水洗脱、再用5倍柱体积0.1％HCl—75％乙醇vv，即100mL溶液中含有0.1mL的HCl和75mL的乙醇，其余为去离子水洗脱至无色，合并洗脱液；将洗脱液在50℃、50rmin、真空度0.09Mpa条件下减压浓缩至密度为1.05×103kgm3，再在冷阱温度-40℃、真空度75Pa条件冷冻干燥8～9h，得到山葡萄锦葵素。2超高压稳态化处理A先取5倍咖啡酸质量无水乙醇溶解咖啡酸，然后加入上述得到的山葡萄锦葵素，再用pH为3.0的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液稀释至山葡萄锦葵素的浓度为0.1mgmL，即可得到反应液备用；所述锦葵素与咖啡酸的浓度比1:4；B将反应液先在避光、55℃水浴条件下混合45min；然后在300MPa压力条件下进行8min的超高压稳态化处理，得到处理液；C处理液以4000rmin转速离心8min后分离得到上清液；再将上清液在8℃条件下，以1.5BVh的上样速率上样至D101大孔树脂柱中，然后静置25min；接着以1.5BVh洗脱速率先用5倍柱体积去离子水洗脱、再用0.1％HCl—75％乙醇vv，即100mL溶液中含有0.1mL的HCl和75mL的乙醇，其余为去离子水洗脱5倍柱体积至无色，合并洗脱液；将洗脱液在50℃，50rmin，真空度0.09Mpa条件下减压浓缩至密度为1.05×103kgm3，再经过冷阱温度-40℃，真空度75Pa条件冷冻干燥9h，得到稳态化锦葵素衍生物。实施例3本发明实施例3提供了一种稳态化锦葵素衍生物的制备方法，具体包括如下步骤1提取纯化山葡萄锦葵素A、将山葡萄去果柄后加入胶体磨中，以2000rmin转速研磨20min得到山葡萄研磨浆；然后将山葡萄研磨浆按照与提取液质量比为1:5加入至盐酸、乙醇和去离子水混合得到的提取液中，提取液浓度为0.1％盐酸—55％乙醇vv，即100mL溶液中含有0.1mL的HCl和55mL的乙醇，其余为去离子水，并置于高压脉冲电场中进行提取，所述高压脉冲电场的电场强度为10kVcm、脉冲个数为4；接着以3000rmin转速离心15min后分离得到上清液；最后上清液在40℃、40rmin、真空度0.08Mpa条件下减压浓缩至密度为1.0×103kgm3的浓缩液B、在4℃条件下，将浓缩液用去离子水稀释5倍，以1BVh的上样速率上样至D101大孔树脂柱中，然后静置15min；接着以1BVh洗脱速率先用4倍柱体积去离子水洗脱、再用4倍柱体积0.1％HCl—75％乙醇vv，即100mL溶液中含有0.1mL的HCl和75mL的乙醇，其余为去离子水洗脱至无色，合并洗脱液；将洗脱液在45℃、40rmin、真空度0.08Mpa条件下减压浓缩至密度为1.0×103kgm3，得山葡萄花青素膏体；C、用体积浓度为0.5％的盐酸甲醇溶液将山葡萄花青素膏体稀释20倍；然后采用制备型高效液相色谱进行分离，进样量为2mL，流动相以2mLmin流速进行洗脱，流动相由A相为5％vv甲酸水溶液和B相为甲醇按照浓度梯度组成，洗脱时间和浓度梯度对应关系为：0～5min流动相中B相体积分数由8％递增至10％、5～50min流动相中B相体积分数为10％、50～55min流动相中B相体积分数由10％递增至15％、55～60min流动相中B相体积分数由15％递增至20％、60～80min流动相中B相体积分数由20％递增至25％、80～100min流动相中B相体积分数由25％递增至35％、100～105min流动相中B相体积分数由35％递增至70％；在78～80min和90～92min时收集锦葵类花青素洗脱液，再在冷阱温度-40℃、真空度100Pa条件冷冻干燥8h，即可得到山葡萄锦葵类花青素提取物；高效液相色谱分离过程中采用Waters2545制备型高效液相色谱、Waters2489UVVis检测器、SunFirePrepC18柱，所述SunFirePrepC18柱尺寸为10mm×250mm，5μm，SunFirePrepC18柱的柱温为25℃；检测波长为530nm；D、将1g山葡萄锦葵类花青素提取物用体积浓度为10％的盐酸甲醇溶液溶解定容至25mL，并于沸水浴中水解1h，冷水浴冷却，在45℃，40rmin，真空度0.08Mpa条件下减压浓缩至密度为1.0×103kgm3，再通过有机滤膜过滤得到滤液；将滤液稀释10倍后，在4℃条件下，以1BVh的上样速率上样至D101大孔树脂柱中，然后静置15min；接着以1BVh洗脱速率先用4倍柱体积去离子水洗脱、再用4倍柱体积0.1％HCl—75％乙醇vv，即100mL溶液中含有0.1mL的HCl和75mL的乙醇，其余为去离子水洗脱至无色，合并洗脱液；将洗脱液在45℃、40rmin，真空度0.08Mpa条件下减压浓缩至密度为1.0×103kgm3，再经过冷阱温度-40℃、真空度50Pa条件冷冻干燥8h，得到山葡萄锦葵素。2超高压稳态化处理A先取3倍咖啡酸质量的无水乙醇溶解咖啡酸，然后加入上述得到的山葡萄锦葵素，再用pH为3.0的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液稀释至山葡萄锦葵素的浓度为0.1mgmL，即可得到反应液备用；所述锦葵素与咖啡酸的浓度比1:3；B将反应液先在避光、50℃水浴条件下混合30min；然后在200MPa压力条件下进行15min的超高压稳态化处理，得到处理液；C处理液以3000rmin转速离心10min后分离得到上清液；再将上清液在4℃条件下，以1BVh的上样速率上样至D101大孔树脂柱中，然后静置15min；接着以1BVh洗脱速率先用4倍柱体积去离子水洗脱、再用4倍柱体积0.1％HCl—75％乙醇vv，即100mL溶液中含有0.1mL的HCl和75mL的乙醇，其余为去离子水洗脱至无色，合并洗脱液；将洗脱液在45℃，40rmin，真空度0.08Mpa条件下减压浓缩至密度为1.0×103kgm3，再在冷阱温度-40℃、真空度50Pa条件冷冻干燥8h，得到稳态化锦葵素衍生物。实施例4本发明实施例4提供了一种稳态化锦葵素衍生物的制备方法，具体包括如下步骤：1提取纯化山葡萄锦葵素A、将山葡萄去果柄后加入胶体磨中，以3500rmin转速研磨15min得到山葡萄研磨浆；然后将山葡萄研磨浆按照与提取液质量比为1:8.5加入至盐酸、乙醇和去离子水混合得到的提取液中，所述提取液浓度为0.1％盐酸—65％乙醇vv，即100mL溶液中含有0.1mL的HCl和65mL的乙醇，其余为去离子水，并置于高压脉冲电场中进行提取，所述高压脉冲电场的电场强度为15kVcm、脉冲个数为6；接着以4500rmin转速离心10min后分离得到上清液；最后上清液在50℃、50rmin、真空度0.09Mpa条件下减压浓缩至密度为1.05×103kgm3的浓缩液；B、在6℃条件下，将浓缩液用去离子水稀释5倍以1.5BVh的上样速率上样至D101大孔树脂柱中，然后静置20min；接着以1.5BVh洗脱速率先用5倍柱体积去离子水洗脱、再用5倍柱体积0.1％HCl—75％乙醇vv，即100mL溶液中含有0.1mL的HCl和75mL的乙醇，其余为去离子水洗脱至无色，合并洗脱液；将洗脱液在50℃，50rmin，真空度0.09Mpa条件下减压浓缩至密度为1.05×103kgm3，得山葡萄花青素膏体；C、用体积浓度为1％的盐酸甲醇溶液将山葡萄花青素膏体稀释15倍；然后采用制备型高效液相色谱进行分离，进样量为2mL，流动相以2mLmin流速进行洗脱，流动相由A相为5％vv甲酸水溶液和B相为甲醇按照浓度梯度组成，洗脱时间和浓度梯度对应关系为：0～5min流动相中B相体积分数由8％递增至10％、5～50min流动相中B相体积分数为10％、50～55min流动相中B相体积分数由10％递增至15％、55～60min流动相中B相体积分数由15％递增至20％、60～80min流动相中B相体积分数由20％递增至25％、80～100min流动相中B相体积分数由25％递增至35％、100～105min流动相中B相体积分数由35％递增至70％；在78～80min和90～92min时收集锦葵类花青素洗脱液，再在冷阱温度-40℃、真空度75Pa条件冷冻干燥9h，即可得到山葡萄锦葵类花青素提取物；高效液相色谱分离过程中采用Waters2545制备型高效液相色谱、Waters2489UVVis检测器、SunFirePrepC18柱，所述SunFirePrepC18柱尺寸为10mm×250mm，5μm，SunFirePrepC18柱的柱温为25℃；检测波长为530nm；D、将1g山葡萄锦葵类花青素提取物用体积浓度为10％的盐酸甲醇溶液溶解定容至50mL，并于沸水浴中水解1.5h，冷水浴冷却，接着在50℃、50rmin、真空度0.1Mpa条件下减压浓缩至密度为1.05×103kgm3，再通过有机滤膜过滤得到滤液；将滤液稀释15倍后，在6℃条件下，以1.5BVh的上样速率上样至D101大孔树脂柱中，然后静置20min；接着以1.5BVh洗脱速率先用5倍柱体积去离子水洗脱、再用5倍柱体积0.1％HCl—75％乙醇vv，即100mL溶液中含有0.1mL的HCl和75mL的乙醇，其余为去离子水洗脱至无色，合并洗脱液；将洗脱液在50℃、50rmin、真空度0.09Mpa条件下减压浓缩至密度为1.05×103kgm3，再经过冷阱温度-40℃、真空度50Pa条件冷冻干燥8h，得到山葡萄锦葵素。2超高压稳态化处理A先取5倍咖啡酸质量的无水乙醇溶解咖啡酸，然后加入上述得到的山葡萄锦葵素，再用pH为3.0的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液稀释至山葡萄锦葵素的浓度为0.1mgmL，即可得到反应液备用；所述锦葵素与咖啡酸的浓度比1:4.5；B将反应液先在避光、55℃水浴条件下混合45min；然后在300MPa压力条件下进行5min的超高压稳态化处理，得到处理液；C处理液以4500rmin转速离心10min后分离得到上清液；再将上清液在6℃条件下，以1.5BVh的上样速率上样至D101大孔树脂柱中，然后静置20min；接着以1.5BVh洗脱速率先用5倍柱体积去离子水洗脱、再用5倍柱体积的0.1％HCl—75％乙醇vv，即100mL溶液中含有0.1mL的HCl和75mL的乙醇，其余为去离子水洗脱至无色，合并洗脱液；将洗脱液在50℃，50rmin，真空度0.09Mpa条件下减压浓缩至密度为1.05×103kgm3，再经过冷阱温度-40℃、真空度75Pa条件冷冻干燥9h，得到稳态化锦葵素衍生物。实施例5稳态化锦葵素衍生物的结构鉴定1、检测方法1高效液相色谱条件：ThermoSyncronisC18色谱柱100mm×3mm，1.7μm，梯度洗脱，流动相为0.1％vv甲酸水溶液A和乙腈B；梯度洗脱：0～2min，8～10％B；2～11min，10％B；11～19min，10～15％B；19～24min，15～20％B；24～27min，20～25％B；27～33min，25～35％B；33～36min，35～45％B；36～38min，45～55％B；38～45min，55～80％B。柱温30℃；流速0.2mLmin；进样量10μL。2质谱条件：采用电喷雾正离子扫描模式ESI+，干燥气温度350℃，雾化气流速35arb，辅助气流速10arb，质量扫描范围mz50～1000。2、检测结果1分别将实施例4制备得到的山葡萄锦葵素[实施例41制得，图1]和稳态化锦葵素衍生物图2按照上述方法进行检测得到的高效液相色谱图如图1～2所示。由图1～2结果可以明显得知，稳态化处理前后山葡萄锦葵素的高效液相图谱存在明显差异说明，山葡萄锦葵素与咖啡酸在超高压条件下发生反应生成稳态化锦葵素衍生物。2分别将实施例4制备得到的稳态化锦葵素衍生物按照上述方法进行检测，得到的稳态化锦葵素衍生物的MSMS图谱和化合物结构如图3所示，MSMS数据如表1所示。表1稳态化锦葵素衍生物的MSMS数据由图3和表1的结果可以明显得知：在正离子模式下，锦葵素与咖啡酸键合后锦葵素衍生物存在准分子离子峰mz439.10351，在二级串联质谱中可见碎片离子mz331.12247，150.33725。其中碎片离子mz331.12247是由分子离子mz493.11532失去1分子质量数为108的邻羟基苯酚产生的；mz150.33725是由花青素C环发生02位C-C键断裂而产生的0,2A+·自由基正离子表1，图3。根据结果分析，鉴定锦葵色素与咖啡酸键合后的新青素化合物鉴定为：锦葵-3-O-愈创木酚Malvidin-3-O-guiacol，Mv3C，分子式为C23H19O9，分子量439，结构见图3。如图4所示超高压稳态化处理促进稳态化锦葵素衍生物形成的机理是山葡萄锦葵素与咖啡酸键合，脱去丙烯酸基后与酚环结合得稳态化锦葵素衍生物锦葵-3-O-愈创木酚。实施例6稳态化锦葵素衍生物的稳定性评价1、计算辅色率Copigmentationrate,C评估超高稳态化反应效果将上述实施例4步骤1中制备得到的山葡萄锦葵素稀释至浓度为0.1mgmL在最大吸收波长λ521nm处测定吸光值为A0；将上述实施例4制备得到的稳态化锦葵素衍生物稀释至浓度为0.1mgmL后，在最大吸收波长λ521nm处测定各组吸光值。然后，按公式1计算稳态后花青素的辅色率Copigmentationrate,C，结果如下表2所示，评估超高稳态化反应效果。C％＝[A-A0A0]×100公式1式中：A为稳态化处理后花青素溶液的吸光度；A0为未稳态化处理花青素溶液的吸光度。2、评估温度和光照对稳态化锦葵素衍生物的影响1使用pH3.0缓冲液分别将将上述实施例4制备得到的山葡萄锦葵素及稳态化锦葵素衍生物和实施例4步骤1中制备得到的山葡萄锦葵素稀释到花青素浓度为0.1mgmL，用于颜色稳定性评估。2在100℃条件下处理2h，评估温度对花青素的影响。3在室温自然光条件下处理20d，评估光照对花青素的影响。4按照2或3所述方法处理前后分别在λ521nm处测定吸光度值，然后按公式2计算花青素溶液的保存率Retentionrate,R，得到的结果如表2所示R％＝AtA×100公式2式中：At为光、热不同处理时间后溶液的吸光度值；A为光、热处理前溶液的吸光度值。表2超高压稳态化处理结果评价由上述表2中的数据可以明显得知：锦葵素衍生物超高压稳态化处理后表1增色率平均值为42.99±0.05％，RSD值为0.13％；锦葵素衍生物在100℃加热2h或在室温日光放置20d后，其保存率R值虽较初始值降低，但仍在50％以上，较比未稳态化处理锦葵素溶液颜色保持更好，而此时锦葵素溶液颜色全部消失，这是由于其非常不稳定的性质。实施例7锦葵素衍生物抗氧化应激作用评价1试验分组取健康雄性ICR小鼠，雄性，体重20±2g，购于长春市亿斯实验动物技术有限责任公司，许可证号：SCXK吉2016-0004。适应性饲养1周后，随机分为空白对照组、模型组、山葡萄锦葵素组实施例4步骤1、稳态化锦葵素衍生物组实施例4，每组10只。2造模及给药方法试验开始后，模型组、山葡萄锦葵素组、稳态化锦葵素衍生物组每天腹腔注射98％D-半乳糖，剂量为500mgkg，空白对照组腹腔注射等量的生理盐水。如表3所示：山葡萄锦葵素组和稳态化锦葵素衍生物组每天分别灌胃给药；空白对照组和模型组灌胃给予等量的生理盐水。每隔2～3天称重，连续灌胃给药35天。试验期间，每日观察并记录小鼠的体重、毛发色泽及变化、饮食饮水、自主活动、精神状态和死亡情况，得到的各组小鼠体重变化如下表4所示。表3实验动物分组3小鼠脏器指数的测定喂养35天后，禁食12小时，称重，眼球取血后，迅速摘取出心、肝、脾、肺、肾、脑等脏器，生理盐水冲洗，滤纸吸干，准确称重，并按如下公式3计算脏器指数％，结果如下表5所示。脏器指数％＝脏器重量小鼠体重×100％公式34小鼠血清及肝脏中生化指标的测定小鼠摘取眼球取血，置于离心管中，4000rpm离心，10min，取上清液用于血清中生化指标的测定。同时摘取小鼠肝脏组织，剔除脂肪，生理盐水冲洗，滤纸吸干，称重。制备10％的肝组织匀浆液，4000rpm离心，10min，用于肝脏组织中生化指标的测定。按照试剂盒中说明书进行总抗氧化能力T-AOC、过氧化氢酶CAT、丙二醛MDA、超氧化物歧化酶SOD、谷胱甘肽过氧化物酶GSH-Px测定，得到的结果分别如表6～10所示。5脏器组织切片的制备及染色小鼠摘取脏器测定脏器指数后，置于4℃预冷的4％多聚甲醛溶液中固定保存。制作脏器组织切片及染色。在光学显微镜下分别在40倍、200倍、400倍下观察得到的结果如图5～6所示。6对于上述得到的数据以平均数±标准差X±SD表示，采用SPSS软件处理试验数据，组间差异用t检验计算。表4各组小鼠体重变化比较表5小鼠脏器指数指标表6对小鼠SOD活性的影响表7对小鼠GSH-Px活性的影响表8对小鼠CAT活性的影响表9对小鼠T-AOC活性的影响表10对小鼠MDA含量的影响注：与空白对照组CK比较，*代表显著性差异p0.05，**代表极显著性差异p0.01；与模型组M比较，Δ代表显著性差异p0.05，ΔΔ代表极显著性差异p0.01，与山葡萄锦葵素组A比较，▲代表有显著性差异p0.05，▲▲代表有极显著性差异p0.01。由上述数据结果可以明显得知：山葡萄锦葵素及稳态化锦葵素衍生物能明显改善氧化损伤小鼠的各种体征，并对氧化损伤小鼠体重的增长有促进作用表4。通过对小鼠脏器指数的考察结果表明表5，山葡萄锦葵素及稳态化锦葵素衍生物能够使损伤小鼠的肝、脾、心、脑、肾、胸腺脏器指数显著升高p0.01。通过对小鼠血清及肝脏中生化指标的测定结果表明表6～10，与模型组比较，山葡萄锦葵素及稳态化锦葵素衍生物能够显著升高血清及肝脏中SOD、GSH-Px、CAT、T-AOC等抗氧活酶的活性p0.01，显著降低MDA的含量p0.01，对于肝脏中SOD、GSH-Px及MDA指标，稳态化锦葵素衍生物的作用效果明显优于山葡萄锦葵素p0.01。肝脏和肾脏是人体最重要的代谢和解毒器官，D-半乳糖致小鼠氧化损伤，直接导致肝脏和肾脏的病变，功能减退，同时使心脏衰竭。稳态化锦葵素衍生物可以很好地保护肝脏、肾脏及心脏不受损伤，使细胞形态基本恢复正常状态图5～6。结合其增加抗氧化酶活力指标，说明稳态化锦葵素衍生物可以通过清除体内自由基进而保护细胞完整和活力，从而达到抗氧化应激作用，且抗氧化损伤能力优于山葡萄锦葵素。实施例8稳态化锦葵素衍生物调节肠道作用评价1、实验分析方法1试验分组取健康雄性ICR小鼠，雄性，体重20±2g，购于长春市亿斯实验动物技术有限责任公司，许可证号：SCXK吉2016-0004。适应性饲养1周后，随机分为空白对照组、模型组、山葡萄锦葵素组实施例4步骤1、稳态化锦葵素衍生物组实施例4，每组10只。2造模及给药方法试验开始后，模型组、山葡萄锦葵素组、稳态化锦葵素衍生物组每天腹腔注射98％D-半乳糖，剂量为500mgkg，空白对照组腹腔注射等量的生理盐水。如表3所示：山葡萄锦葵素组和稳态化锦葵素衍生物组每天分别灌胃给药；空白对照组和模型组灌胃给予等量的生理盐水，连续灌胃给药30d。3粪便标本的采集喂养30d时，给药30min后，分别收集空白对照组CK、模型组M、稳态化锦葵素衍生物组U、山葡萄锦葵素组A每组取6只小鼠新鲜粪便样本各1份，分别为空白对照组CK1、CK2、CK3、CK4、CK5、CK6模型组M1、M2、M3、M4、M5、M6、稳态化锦葵素衍生物组U1、U2、U3、U4、U5、U6、山葡萄锦葵素组A1、A2、A3、A4、A5、A6，收集新鲜粪便置于无菌冻存管中，立即放入液氮中速冻30min，全部样品收集完毕放入-80℃超低温冰箱中保存。3粪便标本中DNA的提取按照PowerSoilDNAIsolationKitMOBIOLaboratories试剂盒说明书从小鼠粪便中进行总细菌DNA的提取。通过260280nm和260230nm的比率评估DNA质量和数量。然后将DNA储存在-80℃直至进一步处理。4PCR扩增及纯化①扩增引物②目标区域PCR扩增体系及反应条件总体积50μL；PCR反应条件：95℃预变性5min，95℃变性1min，50℃退火1min，72℃延伸7min，15个循环；目标区域PCR产物纯；SolexaPCR：在98℃下初始变性30s，98℃下10s，65℃30s，72℃下30s，72℃延伸5min，10个循环；磁珠纯化；Nanodrop定量及混样：纯化后的产物进行Nanodrop2000定量后，按照质量比1:1进行混样；切胶回收。5IlluminnaMiseq测序使用IlluminaHiseq2500平台PE250对纯化的样品进行高通量测序分析。6生物信息学分析①操作分类单元OperationalTaxonomicUnits，OTU分析在相似性97％的水平上对序列进行聚类，以测序所有序列数的0.005％作为阈值过滤OTU。②α多样性分析Alpha-diversity③β多样性分析Beta-diversity④物种组成分析2、结果分析对于上述分析结果，通过与Silva数据库进行比对，利用RDPClassifier、MEGAN5、PyNAST、Mothurversionv.1.30、QIIME、R语言等软件和工具绘图及进行统计学分析，得到稳态化锦葵素衍生物调节肠道作用评价结果如表11和图8～12所示。1根据空白对照组CK、模型组M、稳态化锦葵素衍生物组U、山葡萄锦葵素组A24个样本获得的OTU通过统计学进行分析，结果如表11所示。表11样品多样性指数表由上述表11中的结果可以明显得知：24个样品的小鼠粪便中细菌的平均Ace指数359.177、Chao1指数363.479、Shannon指数3.602、Simpson指数0.100。其中Ace指数和Chao1指数越大，表明样品中肠道微生物数量多，而Shannon指数大，Simpson指数小，表明样品中物生物物种多样性越高。各组样品中的多样性指数差异较小，即各组样品的菌群多样性大致相同。2根据样本不同测序深度所得到的OTU数和Shannon指数绘制小鼠肠道菌群样品稀释性曲线Rarefactioncurve如图8所示，小鼠肠道菌群样品香农指数曲线shannon-Wienercurve如图9所示。由图8稀释性曲线结果表明，除样品U5、U6样品在20000Reads水平时仍稍呈上升趋势外，其他样本在20000-100000Reads曲线逐渐平缓，且接近平台期，说明测序量已基本足够。由图9香农曲线结果表明，所有样本均饱和，说明测序数据基本合理，可以反应样本中绝大多数的微生物多样性信息，能够很好的反映出样品中细菌群落结构和多样性。3进行主坐标分析可实现多个样品分类，展示样品间物种多样性差异，结果如图10小鼠肠道菌群主成分分析图所示。由图10结果可知所示，第一主成分和第二主成分的贡献率分别为17.79％和14.54％。4组间样本没有完全区分，但氧化损伤模型组与其他试验组样本可以完全区分开，说明模型组与空白组及给药组中样品细菌菌群结构相差较明显；而空白对照组、稳态化锦葵素衍生物组和山葡萄锦葵素组的样本无法完全分开，组内分布较为分散，说明这三组的细菌菌群结构存在交叉现象，可能是动物本身个体差异造成的，但是可以明显区别于模型组，结果表明氧化损伤对小鼠肠道菌群结构，且稳态化锦葵素衍生物具有调节肠道作用，有利于缓解氧化损伤。4绘制小鼠肠道菌群各组样本在门水平的结构图如图11所示、4组样本A和24个样本B在属水平的结构图如图12所示。由图11和图12结果表明：在门水平上，D-半乳糖致氧化损伤小鼠肠道菌群中厚壁菌门Firmicutes相对丰度增加，拟杆菌门Bacteroidetes相对丰度降低。稳态化锦葵素衍生物组和山葡萄锦葵素组逆转了氧化损伤小鼠中Firmicutes和Bacteroidetes比例的变化。在属水平上，氧化损伤小鼠肠道菌群中有害菌拟杆菌属Bacteroides、拟普雷沃氏菌属Alloprevotella和Alistipes的相对丰度显著升高，螺杆菌属Helicobacter和乳酸杆菌属Lactobacillus的相对丰度显著降低。稳态化锦葵素衍生物和山葡萄锦葵素干预逆转了这些变化，使得有益菌乳酸杆菌属Lactobacillus相对丰度增加，有害菌拟杆菌属Bacteroides、拟普雷沃氏菌属Alloprevotella、Alistipes相对丰度减少。说明稳态化锦葵素衍生物的抗氧化损伤作用与其对宿主肠道菌群结构的影响有关。本说明书中各个实施例采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。对于实施例公开的装置而言，由于其与实施例公开的方法相对应，所以描述的比较简单，相关之处参见方法部分说明即可。对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。

权利要求：1.一种稳态化锦葵素衍生物，其特征在于，所述稳态化锦葵素衍生物的结构式为：2.一种如权利要求1所述的稳态化锦葵素衍生物的制备方法，其特征在于，具体包括如下步骤：1提取纯化山葡萄锦葵素：采用高压脉冲电场技术提取山葡萄中的花青素，再经过分离、纯化得到山葡萄锦葵素；2超高压稳态化处理：将上述制备得到的山葡萄锦葵素与咖啡酸进行超高压稳态化处理，得到稳态化锦葵素衍生物。3.根据权利要求2所述的一种稳态化锦葵素衍生物的制备方法，其特征在于，所述步骤1具体包括：A、将山葡萄破碎后在高压脉冲电场中提取，然后经过分离、浓缩得到浓缩液；B、利用大孔树脂柱对上述浓缩液进行洗脱，得到的洗脱液经过浓缩得到山葡萄花青素膏体；C、将山葡萄花青素膏体稀释后利用制备型高效液相色谱进行分离，收集得到锦葵类花青素洗脱液，再经过冷冻干燥即可得到山葡萄锦葵类花青素提取物；D、将山葡萄锦葵类花青素提取物依次经过溶解、水解、过滤得到滤液，滤液采用大孔树脂柱纯化后，再经过减压浓缩、冷冻干燥即可得到山葡萄锦葵素。4.根据权利要求3所述的一种稳态化锦葵素衍生物的制备方法，其特征在于，所述步骤A具体为：将山葡萄去果柄后加入胶体磨中，以2000～4000rmin转速研磨10～20min得到山葡萄研磨浆；然后将山葡萄研磨浆按照与提取液质量比为1:5～9加入至盐酸、乙醇和去离子水混合得到的提取液中，所述提取液浓度为0.1～0.5％盐酸—55～75％乙醇vv，即100mL溶液中含有0.1～0.5mL的HCl和55～75mL的乙醇，其余为去离子水，并置于高压脉冲电场中进行提取，所述高压脉冲电场的电场强度为10～20kVcm、脉冲个数为4～10；接着以3000～5000rmin转速离心5～15min后分离得到上清液；最后上清液在40～55℃、40～60rmin、真空度0.08～0.1Mpa条件下减压浓缩至密度为1.0～1.1×103kgm3的浓缩液。5.根据权利要求3所述的一种稳态化锦葵素衍生物的制备方法，其特征在于，所述步骤B具体为：在4～10℃条件下，将浓缩液用去离子水稀释5～10倍，以1～2BVh的上样速率上样至D101大孔树脂柱中，然后静置15～35min；接着以1～2BVh洗脱速率先用4～6倍柱体积去离子水洗脱、再用4～6倍柱体积的盐酸、乙醇和去离子水的混合溶液洗脱至无色，合并洗脱液；将洗脱液在45～55℃、40～60rmin、真空度0.08～0.1Mpa条件下减压浓缩至密度为1.0～1.1×103kgm3，得山葡萄花青素膏体；所述盐酸、乙醇和去离子水的混合溶液中盐酸的体积浓度为0.1％，乙醇的体积浓度为75％。6.根据权利要求3所述的一种稳态化锦葵素衍生物的制备方法，其特征在于，所述步骤C具体为：用浓度为0.5～1％vv的盐酸-甲醇溶液将山葡萄花青素膏体稀释10～20倍；然后采用制备型高效液相色谱进行分离，进样量为2mL，流动相以2mLmin流速进行洗脱，流动相由A相为5％vv甲酸水溶液和B相甲醇，按照下述洗脱时间和洗脱梯度对应关系进行分离制备：0～5min流动相中B相体积分数由8％递增至10％、5～50min流动相中B相体积分数为10％、50～55min流动相中B相体积分数由10％递增至15％、55～60min流动相中B相体积分数由15％递增至20％、60～80min流动相中B相体积分数由20％递增至25％、80～100min流动相中B相体积分数由25％递增至35％、100～105min流动相中B相体积分数由35％递增至70％；在78～80min和90～92min时收集锦葵类花青素洗脱液，再在冷阱温度-40℃、真空度50～100Pa条件冷冻干燥8～10h，即可得到山葡萄锦葵类花青素提取物。7.根据权利要求3所述的一种稳态化锦葵素衍生物的制备方法，其特征在于，所述步骤D具体为：将1～5g山葡萄锦葵类花青素提取物用体积浓度为5～10％的盐酸甲醇溶液溶解定容至25～50mL，并于沸水浴中水解1～2h，再使用冷水浴冷却，接着在45～55℃、40～60rmin、真空度0.08～0.1Mpa条件下减压浓缩至密度为1.0～1.1×103kgm3，再通过有机滤膜过滤得到滤液；将滤液稀释10～20倍后，在4～10℃条件下，将浓缩液用去离子水稀释5～10倍，以1～2BVh的上样速率上样至D101大孔树脂柱中，然后静置15～35min；接着以1～2BVh洗脱速率先用4～6倍柱体积去离子水洗脱、再用4～6倍柱体积的盐酸、乙醇和去离子水的混合溶液洗脱至无色，合并洗脱液；将洗脱液在45～55℃、40～60rmin、真空度0.08～0.1Mpa条件下减压浓缩至密度为1.0～1.1×103kgm3，再经过冷阱温度-40℃，真空度50～100Pa条件冷冻干燥8～10h，得到山葡萄锦葵素；所述盐酸、乙醇和去离子水的混合溶液中盐酸的体积浓度为0.1％，乙醇的体积浓度为75％。8.根据权利要求2所述的一种稳态化锦葵素衍生物的制备方法，其特征在于，所述步骤2具体包括：A先取3～8倍咖啡酸质量的无水乙醇溶解咖啡酸，然后加入上述得到的山葡萄锦葵素，再用pH为3.0的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液稀释至山葡萄锦葵素的浓度为0.1mgmL，即可得到反应液备用；所述锦葵素与咖啡酸的浓度比1:3～5；B将反应液先在避光、50～60℃水浴条件下混合30～60min；然后在200～400MPa压力条件下进行1～15min的超高压稳态化处理；C处理液以3000～5000rmin转速离心5～10min后分离得到上清液；再将上清液在4～10℃条件下，以1～2BVh的上样速率上样至D101大孔树脂柱中，然后静置15～35min；接着以1～2BVh洗脱速率先用4～6倍柱体积去离子水洗脱弃去，再用4～6倍柱体积的盐酸、乙醇和去离子水的混合溶液洗脱至无色，合并洗脱液；将洗脱液在45～55℃、40～60rmin、真空度0.08～0.1Mpa条件下减压浓缩至密度为1.0～1.1×103kgm3，再经过冷阱温度-40℃，真空度50～100Pa条件冷冻干燥8～10h，得到稳态化锦葵素衍生物；所述盐酸、乙醇和去离子水的混合溶液中盐酸的体积浓度为0.1％，乙醇的体积浓度为75％。9.一种稳态化锦葵素衍生物在抗氧化应激方面的应用，其特征在于，所述稳态化锦葵素衍生物采用权利要求2～8任意一项所述方法制备得到。10.一种稳态化锦葵素衍生物在调节肠道方面的应用，其特征在于，所述稳态化锦葵素衍生物采用权利要求2～8任意一项所述方法制备得到。

百度查询： 吉林农业大学 一种稳态化锦葵素衍生物及其制备方法与应用