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申请/专利权人：华中科技大学
摘要：本发明涉及一种甲状腺素干扰物的高灵敏筛选方法，属于新污染物筛选方法技术领域。本发明基于纳米金多肽材料结合了多肽的生物识别性能与纳米金的类过氧化物酶活性，基于此构建了一种既能保证多肽活性又能发挥纳米金酶活性的中碱性条件下的甲状腺素干扰物筛选方法。中碱性条件下，多巴胺能够被纳米金催化快速生成红色产物。一旦干扰物结合特异性识别多肽，占据了纳米金的酶活性识别位点，降低了酶活性，在多巴胺显色体系中表现出不同的吸光度值，从而体现出甲状腺素干扰毒性效应，达到识别甲状腺素干扰物的目的。该方法无需使用大量有机溶剂，而且通过吸光度测定即可实现甲状腺素干扰物毒性评估，具有制备简单、成本低廉、灵敏度高等优势。
主权项：1.一种甲状腺素干扰物的高灵敏筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：1将纳米金分散液加入到多肽溶液中，形成纳米金-多肽材料，多肽的氨基酸序列如SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6或SEQIDNO:7所示；2将步骤1得到的纳米金-多肽材料与浓度已知的不同浓度的待测化合物孵育后平铺在滤膜上，然后在所述滤膜上依次加入中碱性的缓冲液、双氧水溶液和多巴胺溶液，多巴胺和双氧水在纳米金的类酶活性催化下，在中碱性条件下能够稳定生成红色物质；然后分别测定峰值470nm处的吸光度值A470nm以及背景值750nm处的吸光度值A750nm，ΔA＝A470nm-A750nm；以各个浓度待测化合物的ΔA分别比上空白对照的ΔA作为纵坐标，以对应待测化合物的浓度的对数值作为横坐标，拟合得到剂量效应曲线；所述不同浓度的待测化合物能使得所述剂量效应曲线出现两个平台期；3将步骤2得到的剂量效应曲线上的两个平台期对应的纵坐标的差值的绝对值作为总的干扰抑制效应，将该总的干扰抑制效应的20％在所述剂量效应曲线上对应的纵坐标记为IR20，将该总的干扰抑制效应的50％在所述剂量效应曲线上对应的纵坐标记为IR50，ΔIR＝IR20-IR50；若ΔIR≥0.01，即所述待测化合物为甲状腺素干扰物，若ΔIR＜0.01，即所述待测化合物为非甲状腺素干扰物。
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百度查询： 华中科技大学 一种甲状腺素干扰物的高灵敏筛选方法
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