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申请/专利权人：重庆博视知识产权服务有限公司

摘要：高毒性重金属引发的环境和水体污染一直是人类面临的严重问题。As3+、Pb2+和Hg2+均是具有严重毒性的、分布广泛的环境污染物，即使在低浓度下也会对环境和人类构成严重威胁。世界卫生组织对饮用水的标准作出了严格的限定。因此，建立高效、灵敏的可同时检测As3+、Pb2+和Hg2+的分析方法对于环境监测、食品安全等领域至关重要。本发明提出了一种可同时检测As3+、Pb2+和Hg2+的方法，该方法采用基于核酸外切酶循环放大技术的纳米胶囊‑核酸生物分子复合物不但能够实现对As3+、Pb2+和Hg2+的同时检测，而且在确保高特异性的前提下，检测灵敏度均得到显著提高，同时，还获得了更宽的线性检测范围。

主权项：1.一种可同时检测As3+、Pb2+和Hg2+的方法，其特征在于包括以下步骤：1将含有As3+、Pb2+和Hg2+的溶液加入到由3种核酸生物识别分子、3种荧光信号分子和具有中空、多孔结构的纳米金构建而成的纳米胶囊-核酸生物分子复合物中，用Tris-HCl缓冲溶液稀释，加入剪切酶EXOⅢ，放入37℃摇床反应1-3h；2磁分离，取上清液进行荧光检测，分别给予相应波长的激发，检测与As3+、Pb2+和Hg2+相对应的荧光染料的荧光信号；所述的3种核酸生物识别分子分别是5’-GGTAATACGACTCACTATAGGGAGATACCAGCTTATTCAATTTTACAGAACAACCAACGTCGCTCCGGGTACTCCTTCTTCATCGAGATAGTAAGTGCAATCC-3’、5’-GGTGGTGGTGGTTGTGGTGGTGGTGG-3’和5’-TTTGTTTGTTGGCCCCCCTTCTTTCTTA-3’；所述的3种荧光信号分子分别是荧光素Cy5、RhB和异硫氰酸荧光素FITC；所述的3种核酸生物识别分子是通过静电作用被分别组装到具有中空、多孔结构的纳米金表面；所述的纳米胶囊-核酸生物分子复合物的制备方法如下：1分别筛选、设计并合成3种核酸生物识别分子，确保其分别对且仅对目标金属离子As3+、Pb2+和Hg2+具有特异性的响应，而对其它任何共存离子和干扰离子没有响应；2将磁珠用pH＝7.4的Tris-HCl缓冲溶液清洗后与具有中空、多孔结构的纳米金载体溶液混合，加入聚二烯丙基二甲基氯化铵溶液，10-12h后磁分离，用pH＝7.4的Tris-HCl缓冲溶液清洗；3加入荧光素Cy5溶液，10-12h后加入可识别As3+的核酸生物分子溶液，10-12h后磁分离，用pH＝7.4的Tris-HCl缓冲溶液清洗，备用；其中，所述的可识别As3+的核酸生物分子的碱基序列为5’-GGTAATACGACTCACTATAGGGAGATACCAGCTTATTCAATTTTACAGAACAACCAACGTCGCTCCGGGTACTCCTTCTTCATCGAGATAGTAAGTGCAATCC-3’；4在2步产物中加入罗丹明B溶液，10-12h后加入可识别Pb2+的核酸生物分子溶液，10-12h后磁分离，用pH＝7.4的Tris-HCl缓冲溶液清洗，备用；其中，所述的可识别Pb2+的核酸生物分子的碱基序列为5’-GGTGGTGGTGGTTGTGGTGGTGGTGG-3’；5在2步产物中加入异硫氰酸荧光素FITC溶液，10-12h后加入可识别Hg2+的核酸生物分子溶液，10-12h后磁分离，用pH＝7.4的Tris-HCl缓冲溶液清洗，备用；其中，所述的可识别Hg2+的核酸生物分子的碱基序列为5’-TTTGTTTGTTGGCCCCCCTTCTTTCTTA-3’；6将3步、4步和5步所得产物分别用pH＝7.4的Tris-HCl缓冲溶液稀释后混合，磁分离，即可制得同时检测As3+、Pb2+和Hg2+的纳米胶囊-核酸生物分子复合物。

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百度查询： 重庆博视知识产权服务有限公司 一种同时检测As³⁺、Pb²⁺和Hg²⁺的方法