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申请/专利权人：河南工业大学

摘要：本发明属于生物传感领域，涉及一种基于Cu2S负载AuPdNPS和酶Ⅲ辅助双循环的电化学传感器制备方法。利用雪花状AuPdCu2S的高导电性及表面积大的优点，后续将具有负载有亚甲基蓝的信号标签连接到电极上，能够实现对信号的增强。同时酶Ⅲ辅助双循环，在目标物四环素的情况下特异性与适配体结合，将爆露出部分序列，从而完成酶Ⅲ辅助双循环，使得大量的信号标签被连接到电极上，实现对信号的放大。利用方波伏安法测得在目标物存在的情况下信号有明显变化，从而实现对抗生素的检测。本发明所构建的电化学生物传感器对抗生素的线性响应范围为0.001‑1000ngmL，检出限为0.299pgmL。且具有良好的抗干扰能力和实际应用能力，为测定实际样品中的抗生素提供了一种新型生物传感平台。

主权项：1.一种基于Cu2S负载AuPdNPS和酶Ⅲ辅助双循环的电化学传感器制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）Cu2S负载双金属AuPdNPS的合成：首先将二水合氯化铜CuCl2·2H2O溶于乙二胺中，之后在搅拌状态下加入硫脲，室温情况下搅拌数小时；混合均匀后转移到高压反应釜中，最终用去离子和无水乙醇交替洗涤数次即可得到Cu2S；在Cu2S溶液中加入贵金属溶液和还原剂，可以获得具有高导电性的金属纳米复合材料AuPdCu2S；（2）信号探针AuCeO2的制备：采用一锅溶剂热法，将六水硝酸铈CeNO33·6H2O和聚乙烯吡咯烷酮PVP超声溶于乙二醇中；后续在上述混合溶液中加入盐酸，为了进一步获得清晰的溶液，继续进行超声处理；之后将混合均匀的溶液放入高压反应釜中即可得到CeO2；后续在CeO2中添加贵金属溶液并且通过碱性溶液调至pH=10，可以得到具有多金属颗粒负载的纳米材料；最后将DNA单链S3和信号探针通过混合震荡连接到材料表面，为后续实验提供电化学信号；（3）电化学传感器的构建：首先在体外构建磁分离体系，通过氨基和羧基的强结合力将适配体DNA单链S1和磁珠MBs相结合，然后加入适配体的互补DNA单链S2恒温震荡孵育，形成双链结构；在目标物存在的情况下，目标物优先和DNA单链S1相结合，暴露出部分单链，加入DNA发夹HP1后会和DNA单链S1链中暴露部分序列形成哑铃状结构，进而加入酶Ⅲ后可以进行循环剪切，经过磁分离后会掉落部分DNA发夹HP1；电极部分将AuPdCu2S添加到金电极上，DNA发夹HP2滴加后通过金-硫键连接到材料上，在目标物存在时使得剪切剩余的部分DNA发夹HP1被添加到电极上，从而将DNA发夹HP2打开，并且在3’端再次形成完全互补的双链，在酶Ⅲ的剪切作用下部分DNA发夹HP1会进行循环从而将电极上的DNA发夹HP2全部打开，使得更多的信号探针被连接到电极上；在没有目标物的情况下，双链结构将不会被破坏，信号标签将无法连接到电极表面；最后利用方波伏安法检测电化学信号实现对卡那霉素的定量检测。

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