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申请/专利权人：成都市食品检验研究院

摘要：本发明提供了固相萃取‑超高效液相色谱‑串联质谱法检测蜂蜜中植物源性毒素的方法，属于检测技术领域。本发明提供的固相萃取‑超高效液相色谱‑串联质谱法检测蜂蜜中植物源性毒素的方法，包括如下步骤：a、标准物质的配制；b、样品前处理；c、UPLC‑MSMS测定。本发明提供了固相萃取‑超高效液相色谱‑串联质谱法检测蜂蜜中植物源性毒素的方法，立足于蜂蜜中同时监测多种植物毒素的应用需求，通过优化提取净化方法和仪器方法，建立同时测定27种PAs、3种木藜芦烷类毒素、3种托品烷类毒素和6种雷公藤类毒素的检测方案。为监测蜂蜜中多种植物毒素残留、提升蜂蜜品质提供技术性支撑。

主权项：1.固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法检测蜂蜜中植物源性毒素的方法，其特征在于：包括如下步骤：a、标准物质的配制：分别准确吸取不同体积的27种PAs混标溶液、闹羊花毒素II、闹羊花毒素III、木藜芦毒素I、阿托品、东茛菪碱、山茛菪碱、雷公藤甲素、雷公藤内酯酮、雷公藤吉碱、雷公藤定碱、雷公藤次碱、雷酚内酯的标准溶液至10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀得混合标准中间溶液，其中，除闹羊花毒素Ⅲ、雷公藤甲素和雷公藤内酯酮为10μgmL外，其余组分浓度均为1μgmL；所述的27种PAs混标溶液是指含石松胺、石松胺氮氧化物、倒千里光碱氮氧化物、蓝蓟定氮氧化物、欧天芥菜碱、欧天芥菜碱氮氧化物、春千里光碱氮氧化物、克氏千里光碱、促黑激素、芝麻菜叶千里光碱氮氧化物、野百合碱、野百合碱氮氧化物、促黑激素氮氧化物、倒千里光碱、毛束草碱、千里光菲林碱、千里光菲林碱氮氧化物、天芥菜碱、天芥菜碱氮氧化物、千里光宁碱、千里光宁碱氮氧化物、蓝蓟定、毛果天芥菜碱、毛果天芥菜碱氮氧化物、夹可灵、夹可灵氮氧化物、春千里光碱的甲醇溶液；b、样品前处理：准确称取混匀样品2g，置于离心管中，加入10mL0.1%-2%的甲酸水溶液，涡旋混匀，超声提取，于15℃下9500rmin离心5min，取上清液，得到待净化液；取待净化液过亲水亲脂平衡型固相萃取柱，加入5mL水进行淋洗，抽干5min；加入10mL甲醇洗脱，收集洗脱液于氮吹管中，45℃氮吹至近干，加入1.0mL甲酸-5mmolL含0.1%甲酸的乙酸铵水溶液，体积比为1：1，溶解残渣，涡旋混合1min，超声2min，过0.22μm滤膜，滤液供UPLC-MSMS测定；c、UPLC-MSMS测定的条件为：液相色谱条件为：色谱柱:ACQUITYUPLCHSSC183.0×150mm，1.7μm；流动相：A为5mmolL含0.1%甲酸乙酸铵溶液，B为甲醇溶液；流速：0.3mLmin；柱温：40℃；进样量：1μL；梯度洗脱程序为：0-2.0min，95%-85%流动相A；2.0-13.0min，85%-60%流动相A；13.0-15.0min，60%-5%流动相A；15.0-20.0min，5%-5%流动相A；20.0-21.0min，5%-95%流动相A；21.0-25.0min，95%-95%流动相A；质谱条件为：离子源类型：ESI源，气帘气流速：35psi；喷雾气流速：55psi；辅助加热气流速：55psi；离子源温度：500℃；离子化电压：5000V；扫描模式：多反应监测模式，39种植物源性毒素的质谱参数分别为：石松胺：保留时间为8.01min，母离子为300.3mz，定量离子为138.3mz，碰撞电压为26eV，定性离子为156.3mz，碰撞电压为39eV；石松胺氮氧化物：保留时间为9.25min，母离子为316.1mz，定量离子为172.1mz，碰撞电压为38eV，定性离子为138.1mz，碰撞电压为36eV；倒千里光碱氮氧化物：保留时间为10.19min，母离子为368.2mz，定量离子为136.2mz，碰撞电压为38eV，定性离子为118.2mz，碰撞电压为40eV；蓝蓟定氮氧化物：保留时间为14.83min，母离子为414.2mz，定量离子为254.1mz，碰撞电压为41eV，定性离子为352.1mz，碰撞电压为33eV；欧天芥菜碱：保留时间为7.44min，母离子为330.1mz，定量离子为138.1mz，碰撞电压为31eV，定性离子为156.3mz，碰撞电压为39eV；欧天芥菜碱氮氧化物：保留时间为8.20min，母离子为346.1mz，定量离子为172.1mz，碰撞电压为40eV，定性离子为328.0mz，碰撞电压为30eV；春千里光碱氮氧化物：保留时间为13.03min，母离子为352.2mz，定量离子为118.1mz，碰撞电压为39eV，定性离子为120.1mz，碰撞电压为38eV；克氏千里光碱：保留时间为15.38min，母离子为366.2mz，定量离子为168.2mz，碰撞电压为38eV，定性离子为150.3mz，碰撞电压为34eV；促黑激素：保留时间为7.72min，母离子为300.1mz，定量离子为138.2mz，碰撞电压为26eV，定性离子为156.2mz，碰撞电压为39eV；芝麻菜叶千里光碱氮氧化物：保留时间为6.85min，母离子为366.1mz，定量离子为136.1mz，碰撞电压为42eV，定性离子为120.1mz，碰撞电压为40eV；野百合碱：保留时间为5.35min，母离子为326.2mz，定量离子为120.3mz，碰撞电压为44eV，定性离子为237.3mz，碰撞电压为32eV；野百合碱氮氧化物：保留时间为6.75min，母离子为342.1mz，定量离子为137.4mz，碰撞电压为37eV，定性离子为236.0mz，碰撞电压为37eV；促黑激素氮氧化物：保留时间为8.92min，母离子为316.1mz，定量离子为111.2mz，碰撞电压为52eV，定性离子为138.1mz，碰撞电压为36eV；倒千里光碱：保留时间为9.80min，母离子为352.2mz，定量离子为120.3mz，碰撞电压为38eV，定性离子为138.3mz，碰撞电压为37eV；毛束草碱：保留时间为10.19min，母离子为354.2mz，定量离子为222.2mz，碰撞电压为38eV，定性离子为120.2mz，碰撞电压为44eV；千里光菲林碱：保留时间为10.60min，母离子为334.2mz，定量离子为120.2mz，碰撞电压为36eV，定性离子为138.2mz，碰撞电压为35eV；千里光菲林碱氮氧化物：保留时间为11.25min，母离子为350.2mz，定量离子为120.1mz，碰撞电压为39eV，定性离子为118.2mz，碰撞电压为40eV；天芥菜碱：保留时间为11.03min，母离子为314.2mz，定量离子为138.2mz，碰撞电压为26eV，定性离子为156.2mz，碰撞电压为37eV；天芥菜碱氮氧化物：保留时间为11.99min，母离子为330.2mz，定量离子为172.1mz，碰撞电压为38eV，定性离子为138.2mz，碰撞电压为36eV；千里光宁碱：保留时间为12.77min，母离子为336.2mz，定量离子为120.2mz，碰撞电压为36eV，定性离子为138.2mz，碰撞电压为38eV；千里光宁碱氮氧化物：保留时间为13.36min，母离子为352.2mz，定量离子为118.1mz，碰撞电压为39eV，定性离子为136.3mz，碰撞电压为37eV；蓝蓟定：保留时间为14.79min，母离子为398.2mz，定量离子为120.2mz，碰撞电压为32eV，定性离子为220.2mz，碰撞电压为23eV；毛果天芥菜碱：保留时间为16.02min，母离子为412.2mz，定量离子为120.2mz，碰撞电压为38eV，定性离子为336.3mz，碰撞电压为24eV；毛果天芥菜碱氮氧化物：保留时间为16.26min，母离子为428.2mz，定量离子为254.1mz，碰撞电压为40eV，定性离子为410.0mz，碰撞电压为31eV；夹可灵：保留时间为7.28min，母离子为352.1mz，定量离子为120.1mz，碰撞电压为38eV，定性离子为155.2mz，碰撞电压为38eV；夹可灵氮氧化物：保留时间为7.87min，母离子为368.1mz，定量离子为296.1mz，碰撞电压为32eV，定性离子为120.1mz，碰撞电压为45eV；春千里光碱：保留时间为12.54min，母离子为336.2mz，定量离子为120.1mz，碰撞电压为36eV，定性离子为138.1mz，碰撞电压为38eV；闹羊花毒素Ⅱ：保留时间为16.52min，母离子为433.2mz，定量离子为415.2mz，碰撞电压为37eV，定性离子为373.2mz，碰撞电压为37eV；闹羊花毒素Ⅲ：保留时间为15.21min，母离子为386.2mz，定量离子为315.0mz，碰撞电压为17eV，定性离子为297.0mz，碰撞电压为20eV；木藜芦毒素Ⅰ：保留时间为14.40min，母离子为435.3mz，定量离子为375.2mz，碰撞电压为30eV，定性离子为357.2mz，碰撞电压为33eV；阿托品：保留时间为11.55min，母离子为290.2mz，定量离子为124.0mz，碰撞电压为32eV，定性离子为93.0mz，碰撞电压为40eV；东茛菪碱：保留时间为8.81min，母离子为304.1mz，定量离子为138.0mz，碰撞电压为30eV，定性离子为156.0mz，碰撞电压为23eV；山茛菪碱：保留时间为9.77min，母离子为306.2mz，定量离子为140.2mz，碰撞电压为33eV，定性离子为122.1mz，碰撞电压为37eV；雷公藤甲素：保留时间为16.79min，母离子为361.2mz，定量离子为145.0mz，碰撞电压为38eV，定性离子为128.0mz，碰撞电压为80eV；雷公藤内酯酮：保留时间为16.73min，母离子为359.3mz，定量离子为91.0mz，碰撞电压为68eV，定性离子为128.0mz，碰撞电压为80eV；雷公藤吉碱：保留时间为17.02min，母离子为858.4mz，定量离子为206.1mz，碰撞电压为50eV，定性离子为686.1mz，碰撞电压为47eV；雷公藤定碱：保留时间为17.09min，母离子为884.5mz，定量离子为176.0mz，碰撞电压为56eV，定性离子为194.0mz，碰撞电压为55eV；雷公藤次碱：保留时间为17.19min，母离子为868.1mz，定量离子为206.0mz，碰撞电压为50eV，定性离子为178.0mz，碰撞电压为65eV；雷酚内酯：保留时间为17.40min，母离子为313.2mz，定量离子为253.1mz，碰撞电压为28eV，定性离子为271.0mz，碰撞电压为28eV。

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