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申请/专利权人：山东第一医科大学(山东省医学科学院)
摘要：本发明公开了一种基于碱基编辑器的丝状真菌连续进化方法及其应用，针对A.nidulansATCC58396中的46个天然产物基因簇核心基因设计sgRNA，利用胞嘧啶编辑器nCas9‑CBE靶向功能和特定位点的胞嘧啶C到胸腺嘧啶T的转变，实现终止密码子的引入和核心基因失活；建立同时表达5个sgRNA的组合文库，并将该文库与CRISPR‑nCas9‑CBE对A.nidulansATCC58396进行六轮连续转化和迭代进化，用于众多天然产物合成基因的突变。本发明设计的基于碱基编辑器的连续进化技术可以在棘白霉素B生产菌株构巢曲霉中实现众多副产物合成关键基因失活，减少了菌株副产物的生产。
主权项：1.一种基于碱基编辑器的丝状真菌连续进化方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1，构建含潮霉素B抗性基因hygR和丝状真菌复制元件AMA1的胞嘧啶编辑器基因表达质粒；步骤2，构建靶向棘白霉素B生产菌株基因组中副产物合成关键基因的tRNA-sgRNA基因表达盒；步骤3，构建表达靶向位点的tRNA-sgRNA阵列表达文库；步骤4，将CRISPR-CBE质粒和tRNA-sgRNA阵列表达文库对菌株进行连续转化。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 山东第一医科大学(山东省医学科学院) 一种基于碱基编辑器的丝状真菌连续进化方法及其应用
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