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申请/专利权人：复旦大学

摘要：本发明涉及基因编辑技术领域，尤其是涉及一种碱基编辑器及其构建方法与应用，用于DNA水平特定位点特定碱基的突变。本发明构建得到编辑特异性更高且RNADNA脱靶风险低的ABE，编辑精度高且RNADNA脱靶风险低的CBE以及体积更小的ACBE工具。本发明中开发的ABE工具在介导A·T‑‑G·C突变时有更高的特异性，其介导C·G‑‑T·A突变的能力被明显抑制，甚至清除，且在RNA和DNA水平的脱靶效应有明显降低，甚至消除；本发明开发的CBE工具在介导C·G‑‑T·A突变时有更高的精确度，且RNA和DNA水平的脱靶效应有明显降低，甚至消除；本发明中开发的ACBE工具，只需要单一的脱氨酶，其体积更小，且在RNA和DNA水平的脱靶效应有明显降低，甚至消除，具有更高的应用价值。

主权项：1.碱基编辑器，其特征在于，为突变型TadA-8e的5’和3’分别添加NLS序列和linker序列后获得NLS-突变型TadA-8e-linker，NLS-突变型TadA-8e-linker置于Cas核酸酶的N-末端、C-末端或内部的融合位点融合形成的融合蛋白；其中，NLS-突变型TadA-8e-linker是指相对于NLS-TadA-8e-linker而言，TadA-8e中氨基酸中一个或几个发生了突变，NLS-TadA-8e-linker的氨基酸序列如SEQIDNO.4所示，NLS-突变型TadA-8e-linker的氨基酸序列为NLS-TadA-8e-linker氨基酸序列中将TadA-8e置换为突变型TadA-8e得到的氨基酸序列；突变型TadA-8e选自以下（1）~（2）中任一种突变后所得的脱氨酶中的一种：（1）TadA-8e中氨基酸进行以下单点突变后所得的脱氨酶：N46L、N46P、N46C、N46Q、N46D；（2）TadA-8e中氨基酸进行以下双点突变后所得的脱氨酶：V28G-N46L，V28G-N46C，V28G-N46P，V28W-N46L，V28W-N46C，V28W-N46P，N46P-N108Y，N46P-N108S，N46P-N108Q，N46P-N108D，N46P-N108C，N46P-N108H，N46P-F84M，N46P-I49A，N46P-I49G，N46P-A48G，N46C-N108Y，N46C-N108S，N46C-N108Q，N46C-N108M，N46C-N108C，N46C-N108H，N46L-N108Y，N46L-N108Q，N46L-N108D，N46L-N108M，N46L-N108H，N46L-F84M，N46L-I49A，N46L-I49G，N46L-V82G，N46C-V82G、N46C-V82T、N46C-F84M、N46L-V82T、N46P-F84M、N46P-N108M。

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