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申请/专利权人：青岛农业大学

摘要：本发明涉及一种检测CMV病毒的胶体金试纸条及其制备方法，所述胶体金试纸条包括PVC板，在PVC板上依次搭接有样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫；所述结合垫是结合有胶体金颗粒标记的兔CMV病毒多克隆抗体的玻璃纤维素膜；所述硝酸纤维素膜上依据样品流动方向依次设置有检测线和质检线，所述检测线包被有CMV病毒重组蛋白，所述质检线包被羊抗兔IgG抗体；所述CMV病毒重组蛋白的核苷酸序列如SEQNo.1所示。本发明利用胶体金免疫层析技术，结合了色谱层析和免疫反应的原理，实现了快速、准确地定性检测病原的目的，可以在田间快速、大规模的检测样品，检测结果准确、可靠。

主权项：1.一种检测CMV病毒的胶体金试纸条，其特征在于，所述胶体金试纸条包括PVC板，在PVC板上依次搭接有样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫；所述结合垫是结合有胶体金颗粒标记的兔CMV病毒多克隆抗体的玻璃纤维素膜；所述硝酸纤维素膜上依据样品流动方向依次设置有检测线和质检线，所述检测线包被有CMV病毒重组蛋白，所述质检线包被羊抗兔IgG抗体；所述CMV病毒重组蛋白的核苷酸序列如SEQNo.1所示；所述检测CMV病毒的胶体金试纸条的制备方法，步骤如下：（1）将胶体金颗粒标记的兔CMV病毒多克隆抗体滴加到玻璃纤维素膜上，滴加至饱和状态，室温晾干，得到结合垫；（2）将CMV病毒重组蛋白和羊抗兔IgG抗体分别点涂于硝酸纤维素膜上，得到含有检测线和质检线的硝酸纤维素膜；（3）在PVC板上沿层析方向依次搭接样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，组装得到胶体金试纸条；所述胶体金颗粒标记的兔CMV病毒多克隆抗体的制备，步骤如下：S1：调节胶体金溶液pH至7.2，将兔CMV病毒多克隆抗体加入；S2：胶体金溶液中兔CMV病毒多克隆抗体的浓度为0.12mgµL，涡旋震荡，室温放置1h；S3：加入终浓度为1%的BSA，其中兔CMV病毒多克隆抗体的终浓度为0.24mgµL，震荡，室温静置1h；S4：13000rpm，4℃离心25min，弃上清；S5：加浓度为2%的BSA重悬沉淀，其中BSA中含0.01molLsodiumborate；S6：加TBS重悬沉淀，获得胶体金颗粒标记的兔CMV多克隆抗体；所述CMV病毒重组蛋白的制备方法，步骤如下：步骤一：设计带有酶切位点的特异性引物用于构建原核表达载体，引物序列如下：CMV-CP-BamHⅠ-1257-F:5’-ACGGATCCatggacaaatctgaatcaaccagt-3’CMV-CP-NotⅠ-1913-R:5’-GTGCGGCCGCtcagactgggagcactcc-3’步骤二：成功构建PE-HIS-CMV-CP原核表达载体；步骤三：将PE-HIS-CMV-CP转入大肠杆菌表达株系的DE3细胞中；步骤四：加IPTG诱导表达获得CMV病毒CP的重组蛋白；步骤五：过镍柱纯化得到纯化后的CMV病毒重组蛋白。

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