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申请/专利权人：青岛科技大学

摘要：一种双模式双极电极电化学发光传感器检测赫曲霉毒素A的方法。本发明研制了一种新型零背景双模式BPE‑ECL生物传感器，开发了一种用于赫曲霉毒素AOTA的检测及成像分析的新方法。ZnCoN‑C能够调控BPE‑ECL传感器的发光电位，采用双适体夹心策略引入ZnCoN‑C，实现对OTA的零背景电化学发光检测及成像分析。

主权项：1.一种双模式双极电极电化学发光传感器检测赫曲霉毒素A的方法，其特征是：利用ZnCoN-C调控传感器的发光电位，构建零背景双模式电化学发光生物传感器，实现对赫曲霉毒素A的电化学发光检测及成像分析；具体步骤：步骤1.ZnCoN-C的制备：将3.75mmolZnNO32·6H2O和3.75mmolCoNO32·6H2O超声分散到30mL无水甲醇中，再将15mmol2-甲基咪唑超声分散到30mL无水甲醇中，然后将上述两种溶液混合，在室温下搅拌10分钟，将混合溶液转移到100mL高压反应釜中，120℃加热4h，用乙醇洗涤，60℃干燥，将干燥的粉末置于瓷舟中，在管式炉中900℃加热3h，升温速率为5℃min,N2气氛，产物自然冷却至室温供进一步使用；步骤2.ZnCoN-C适体Ⅱ探针的制备：将100μL100μg·mL–1的ZnCoN-C与100μL5μM的OTA适体Ⅱ链混合，在37℃下培养2h，将得到的产物离心，并用去离子水洗涤，最后将得到的探针重新分散到100μL0.1MPBS中；适体Ⅱ序列：5’-AAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAGATCGGGTGTGGGTGGCGTAAAGGGAGCATCGGACA-3’步骤3.检测OTA：将传感池中的玻碳电极浸入1％的HAuCl4溶液中，在–0.2V恒电位下还原30s，然后用去离子水洗涤，用三2-羧乙基膦TCEP预处理OTA适体Ⅰ链1h，将6μL的5μMOTA适体Ⅰ链滴在上述修饰的GCE上，4℃孵育过夜，然后加入6μL1％牛血清蛋白，室温孵育60min，加入6μL不同浓度的OTA，室温孵育60min，将6μLZnCoN-C适体Ⅱ探针滴入上述修饰电极孵育60min，最后用于OTA检测；适体Ⅰ序列：5’-SH–AAAAAAGATCGGGTGTGGGTGGCGTAAAGGGAGCATCGGACA-3’步骤4.ECL检测和手机成像分析：光电倍增管PMT设置为350V，电压范围设置为0–4.4V；扫描速率设定为0.5Vs，报告池装有0.1MPBS，pH＝7.4，其中含有0.5mMRubpy32+和25mMTPrA，传感池装有0.1MPBS，pH＝7.4，智能手机拍照需要置于暗室；步骤5.检测啤酒中的OTA：从超市购买四种啤酒，取啤酒样品10mL，超声脱气10min，然后往上述啤酒样品中加入10mLPBS，将pH调整为中性，随后用0.22μm滤膜过滤啤酒样品，去除颗粒杂质，通过在预处理啤酒样品中加入浓度分别为1、10、100和1000pgmL的OTA进行检测。

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