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申请/专利权人：东北林业大学
摘要：本发明涉及一种基于荧光标记的转录因子互作蛋白分离方法，属于蛋白质互作鉴定技术领域。为解决现有转录因子互作蛋白研究方法存在污染蛋白多、背景高导致互作蛋白筛选困难的问题，本发明提供了一种基于荧光标记的转录因子互作蛋白分离方法，先利用标签抗体或亲和磁珠进行免疫共沉淀或亲和纯化，再利用非变性胶电泳在荧光标记的指示下进行切胶纯化蛋白，通过两轮纯化减少蛋白的非特异性结合，高效去除背景蛋白，有效解决了现有方法污染蛋白多、背景高导致互作蛋白筛选困难的问题，进一步完善了研究蛋白质互作的互作蛋白分离方法，使得蛋白质互作的鉴定能够更为准确、高效。本发明适用于所有能被根癌农杆菌侵染的植物物种的转录因子互作蛋白的分离。
主权项：1.一种基于荧光标记的转录因子互作蛋白分离方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一、构建目的转录因子与标签序列融合的植物表达载体，并转化到根癌农杆菌中；步骤二、将步骤一得到的转化菌通过瞬时转化技术侵染宿主或其他植物，获得含有标签蛋白的转基因植物；步骤三、提取步骤二所得的转基因植物的细胞核，并从所述细胞核中分离核蛋白；步骤四、利用免疫共沉淀或亲和纯化从步骤三所得核蛋白中分离目的蛋白复合物；步骤五、合成包含目标转录因子所结合的DNA序列和荧光基团的DNA探针；步骤六、将步骤四得到的目的蛋白复合物与步骤五合成的DNA探针进行孵育，得到DNA-蛋白复合物；步骤七、将步骤六所得DNA-蛋白复合物进行非变性胶电泳，对电泳后的非变性胶进行荧光观察，根据荧光指示出蛋白所在的位置，切下发光的复合物进行纯化，质谱测序后获得与目的转录因子互作的蛋白质序列。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 东北林业大学 一种基于荧光标记的转录因子互作蛋白分离方法
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