买专利卖专利找龙图腾,真高效! 查专利查商标用IPTOP,全免费!专利年费监控用IP管家,真方便!
申请/专利权人:济南微生态生物医学省实验室
摘要:本发明公开了一种基于牵引力显微镜TFM高通量测量细胞力的方法,包括:修饰水凝胶基底的盖玻片、制备含荧光微珠的水凝胶、采集荧光微珠分布图像以及量化和统计分析细胞牵引力。细胞牵引力CTFs由粘附细胞产生,参与调节细胞伸展、迁移和分化等过程。准确测量CTFs对于理解组织和器官发育、衰老和病变等生理过程至关重要。本发明提供了一种改进的细胞牵引力显微镜系统,通过使用嵌入荧光微珠的水凝胶基质记录细胞粘附前后的位移变化,并通过修饰了甲基丙烯酸酯基团的盖玻片增强荧光微珠水凝胶基质与细胞培养皿之间的连接。此外,开发了基于Python的脚本程序pyFTTC进行自动化、高通量数据分析。实现自动化、高通量连续时间测量细胞力。
主权项:1.一种基于牵引力显微镜高通量测量细胞力的方法,其特征在于,包括如下步骤:步骤一:制备用于水凝胶基底的修饰盖玻片,首先使用丙酮和乙醇清洗盖玻片,然后用食人鱼溶液H2SO4:30%H2O2=7:3或用紫外臭氧发生器处理盖玻片以去除有机残留物并羟基化表面,最后将盖玻片浸泡在含有乙醇、醋酸和3-甲基丙烯酰氧丙基三甲氧基硅烷的混合溶液中进行表面修饰;步骤二:制备含有荧光微珠的水凝胶:准备水凝胶预混液,所述水凝胶预混液包含聚乙二醇二丙烯酸酯、光引发剂、RGD肽、荧光微珠和水,将水凝胶预混液滴在未修饰的盖玻片上并用步骤一中修饰的盖玻片倒置覆盖,然后暴露于紫外线中进行凝胶化,再在PBS中孵育水凝胶以使其充分溶胀并稳定,最后剥离未修饰的盖玻片,得到修饰的盖玻片和水凝胶组成的层叠样品;步骤三:采集荧光微珠分布图像:在水凝胶上播种细胞,待细胞贴附后使用激光共聚焦显微镜记录荧光微珠分布图像,即拉伸状态图像;使用细胞裂解液裂解细胞,并使用激光共聚焦显微镜记录细胞裂解后的荧光微珠分布图像,即无力状态图像;步骤四:细胞牵引力的高通量计算:将得到的细胞裂解前后的荧光微珠分布图像,即拉伸状态图像和无力状态图像,使用基于Python语言的脚本程序pyFTTC批量化生成细胞牵引力矢量场。
全文数据:
权利要求:
百度查询: 济南微生态生物医学省实验室 一种基于牵引力显微镜高通量测量细胞力的方法
免责声明
1、本报告根据公开、合法渠道获得相关数据和信息,力求客观、公正,但并不保证数据的最终完整性和准确性。
2、报告中的分析和结论仅反映本公司于发布本报告当日的职业理解,仅供参考使用,不能作为本公司承担任何法律责任的依据或者凭证。