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申请/专利权人：川北医学院附属医院
摘要：本发明公开了一种大鼠肠道微血管周细胞的分离、培养与鉴定方法，属于细胞生物学技术领域；包括S1取SD乳鼠；S2取出肠管，除去血渍和肠系膜后浸泡于含双抗的无钙镁的D‑Hank’s液中；S3清除肠管内容物，其后剖开肠管并漂洗；S4浸泡于酒精溶液并漂洗，其后移入含双抗的DMEM培养基中；S5消化处理；S6弃上清，用FBS+双抗的DMEM完全培养基重悬，沉淀，取上清并过滤；S7取滤液接种于培养皿中，置于培养箱内静置培养；S848h后漂洗，加入含FBS+双抗的DMEM完全培养基培养；S9待细胞融合后进行传代；传代后采用含FBS+双抗的DMEM进行培养；S10在第3次传代后采用细胞荧光染色来鉴定周细胞；本发明解决肠道原代周细胞分离提取的问题，并有效避免了肠道原代细胞提取中细胞遭受污染的问题，同时有效提高肠道微血管周细胞的细胞活力。
主权项：1.一种大鼠肠道微血管周细胞的分离、培养与鉴定方法，其特征在于，包括如下步骤：S1.取SD乳鼠，脱臼处死，并于酒精溶液中浸泡一段时间；S2.无菌条件下开腹，取出肠管，除去血渍和肠系膜，其后浸于含双抗的无钙镁的D-Hank’s液中并浸泡一段时间；S3.浸泡结束后，冲洗并清除肠管内容物，其后纵向剖开肠管，并经含双抗的无钙镁的D-Hank’s液漂洗；S4.在酒精溶液中浸泡一段时间，再使用含双抗的无钙镁的D-Hank’s液漂洗，其后移入少量含10%双抗的DMEM培养基中，剪成组织碎片；S5.对组织碎片进行消化处理；S6.消化完全后，弃上清，用15%FBS+3%双抗的DMEM完全培养基重悬，沉淀，取上清并过滤；S7.取滤液接种于培养皿中，置于培养箱内静置培养；S8.48小时后用PBS漂洗细胞，其后加入含15%FBS+双抗的DMEM完全培养基继续培养，每2天换液；S9.待细胞融合后即可进行传代；传代时采用胰蛋白酶进行消化，传代后继续采用含15%FBS+1%双抗的DMEM进行培养，每2天换液；S10.在第3次传代后采用细胞荧光染色来鉴定周细胞。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 川北医学院附属医院 一种大鼠肠道微血管周细胞的分离、培养与鉴定方法
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