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申请/专利权人：浙江大学
摘要：本发明公开了一种在家蚕中能够同时表达bFGF和EGF且便于蛋白快速纯化的方法。方法是利用基因融合与基因合成技术，并利用杆状病毒编码蛋白密码子偏好性，重新优化设计了bFGF和与EGF两个基因，并将两个基因融合、中间设置TEV酶切位点，随后利用家蚕杆状病毒表达系统构建重组杆状病毒，在家蚕细胞和家蚕中表达了bFGF‑EGF融合蛋白，并利用肝素亲和层析柱快速分离纯化该蛋白，最后利用TEV酶将两者分开，重新过亲和层析柱后实现了两种蛋白的有效分离。本发明方法显著提高了重组蛋白纯化效率，大幅降低了重组bFGF和EGF的生产成本，为重组bFGF和EGF的规模化生产以及医学应用提供了一种具有显著创新的技术。
主权项：1.一种在家蚕中同时表达bFGF和EGF且便于蛋白快速纯化的方法，其特征在于，方法步骤如下：1针对人碱性成纤维生长因子bFGF和人表皮生长因子EGF两个基因进行重新设计，分别形成设计后的人碱性成纤维生长因子bFGF和人表皮生长因子EGF两个基因；2将设计后的人碱性成纤维生长因子bFGF和人表皮生长因子EGF两个基因进行融合，并且设置酶切位点，形成融合序列bFGF-Tev-EGF；3利用融合序列bFGF-Tev-EGF构建表达bFGF-Tev-EGF的重组杆状病毒；4将所述重组杆状病毒导入家蚕培养细胞和家蚕五龄幼虫表达重组蛋白，进而将重组蛋白进行纯化、洗脱处理，然后经酶切后再分别进行纯化、洗脱处理获得人表皮生长因子EGF和人碱性成纤维生长因子bFGF。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 浙江大学 一种在家蚕中同时表达bFGF和EGF且便于蛋白快速纯化的方法
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